胰島素對血管內(nèi)皮細(xì)胞ICAM-1、VCAM-1影響的研究.pdf

1、一、研究背景 動脈粥樣硬化是常見病和多發(fā)病，有極高的死亡率。在工業(yè)化國家，冠狀動脈性心臟病是過早死亡的主要原因，在發(fā)展中國家發(fā)病率在不斷上升。最近研究表明，炎性反應(yīng)在動脈粥樣硬化形成和發(fā)展過程中起主要作用。在細(xì)胞粘附分子介導(dǎo)下，炎性細(xì)胞沿血管內(nèi)皮滾動、粘附，并滲透到內(nèi)皮細(xì)胞下，分泌釋放各種細(xì)胞活性物質(zhì)，引起血管平滑肌細(xì)胞增生，形成泡沫細(xì)胞，最終導(dǎo)致動脈粥樣硬化斑塊的形成。ICAM-1和VCAM-1屬細(xì)胞粘附分子家族，研究表明IC

2、AM-1和VCAM-1心血管病中起重要的作用。胰島素(Insulin,INS)是最近發(fā)現(xiàn)的一個與血管動脈粥樣硬化病理生理緊密相關(guān)的血管激素。血管內(nèi)皮是INS作用的重要器官，INS在維持血管內(nèi)皮正常功能中起重要作用，實(shí)驗(yàn)證明在體內(nèi)高胰島素血癥情況下導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞ET-1、NO分泌失調(diào)，促進(jìn)了糖尿病(DM)血管并發(fā)癥的發(fā)生、發(fā)展，成為動脈粥樣硬化的重要因素。高胰島素血癥在動脈粥樣硬化形成和發(fā)展中是否影響血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子表達(dá)，本研究擬在

3、動物模型和分子水平上對此進(jìn)行研究，為探索高胰島素血癥在動脈粥樣硬化發(fā)生機(jī)制中提供新的理論依據(jù)。 二、研究目的 1.在動物中觀察高胰島素血癥對血管內(nèi)皮細(xì)胞ICAM-1和VCAM-1表達(dá)的影響。 2.胰島素對人血管內(nèi)皮細(xì)胞ECV304中ICAM-1、VCAM-1表達(dá)的影響。 三、研究方法 1.以新西蘭白兔為模型，建立兔高胰島素血癥，動態(tài)檢測兔sICAM-1和sVCAM-1含量，用免疫組織化學(xué)觀察兔血管

4、內(nèi)皮細(xì)胞ICAM-1、VCAM-1的表達(dá)，同時(shí)設(shè)立了一組高糖高脂飲食動物模型進(jìn)行了對比，通過動脈粥樣硬化指數(shù)間接觀察高胰島素和高糖高脂對粥樣硬化形成及發(fā)展的進(jìn)程 2.以人血管內(nèi)皮細(xì)胞株ECV304為受試對象，以100nmol/L胰島素、25mmol/L葡萄糖、200mg/L氧化低密度脂蛋白和混合培養(yǎng)液作用于人血管內(nèi)皮細(xì)胞株ECV304，用半定量RT-PCR檢測ICAM-1、VCAM-1的mRNA水平，通過Westem-blot檢

5、測ICAM-1、VCAM-1蛋白表達(dá)量，從細(xì)胞水平研究他們之間的關(guān)系。 四、研究結(jié)果 1.高胰島素血癥組、高糖高膽固醇組和聯(lián)合組與對照組相比，sICAM-1和sVCAM-1濃度顯著升高；高胰島素血癥組和高糖高膽固醇組sICAM-1和sVCAM-1濃度無顯著性差異；聯(lián)合組sICAM-1和sVCAM-1濃度明顯高于高胰島素血癥組和高糖高膽固醇組。兔胸主動脈組織免疫組化結(jié)果表明：高胰島素血癥組和高糖高膽固醇飲食血管內(nèi)皮細(xì)胞IC

6、AM-1、VCAM-1呈陽性表達(dá)，聯(lián)合組呈強(qiáng)陽性表達(dá)。 2.分別以含胰島素(100nmol/L)、葡萄糖(25mmol/L)、氧化低密度脂蛋白(200mg/L)的培養(yǎng)液與三者混合培養(yǎng)液培養(yǎng)ECV30448h后，通過半定量RT-PCR及WesternBlot對ICAM-1和VCAM-1進(jìn)行mRNA水平及蛋白定量檢測。與對照組相比，實(shí)驗(yàn)組ICAM-1和VCAM-1的mRNA及蛋白表達(dá)量均較對照組高，三者聯(lián)合時(shí)ICAM-1和VCAM-