5-脂氧合酶在異氟醚預(yù)處理誘導(dǎo)腦保護(hù)機制中的作用研究.pdf

1、缺血性腦血管病(Ischemic Cerebrovascular Disease,ICVD)已經(jīng)成為威脅人類生命健康的常見病和多發(fā)病,是一種以腦部血液循環(huán)障礙為主要特征的中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病。腦缺血再灌注過程中炎癥反應(yīng)是造成該類型疾病病理損傷的主要機制,因此,腦缺血再灌注過程中的炎癥反應(yīng)成為研究此類疾病的重要突破點。5-脂氧合酶(5-lipoxygenase,5-LOX)是缺血再灌注損傷后腦內(nèi)生成的重要炎癥因子之一,其在機體的炎癥反應(yīng)中起到

2、關(guān)鍵的作用,同時有大量的實驗證實5-LOX參與了腦缺血后的病理生理過程。另有研究表明巨噬細(xì)胞內(nèi)5-LOX是髓樣細(xì)胞分化因子88(MyD88)依賴性NF-κB生成的關(guān)鍵分子,其抑制劑同樣可以起到腦保護(hù)的作用。
　　另外Toll樣受體(TLRs)介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)參與了腦缺血再灌注損傷中的炎癥反應(yīng)機制。腦缺血再灌注后Toll樣受體4(TLR4)被激活,其通過依賴MyD88信號途徑誘導(dǎo)了NF-κB等活化,從而介導(dǎo)了炎癥級聯(lián)反應(yīng)。其中MyD8

3、8是各種TLRs信號的匯集點,成為信號通路中的關(guān)鍵分子。
　　本課題組前期研究表明,異氟醚預(yù)處理可以通過抑制腦組織TLR4和MyD88的表達(dá)以減輕炎癥反應(yīng),進(jìn)而使大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷減輕。那么,在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中,5-LOX對MyD88依賴性NF-κB生成中起到怎樣的作用,此外異氟醚預(yù)處理是否也可通過抑制5-LOX起到腦保護(hù)的作用?本實驗采用大鼠的大腦中動脈栓塞(MCAO)模型,通過對5-LOX、Myd88及NF-κB等關(guān)鍵分

4、子的定性定量分析,探討腦內(nèi)5-LOX對MyD88依賴性NF-κB生成的作用及其在異氟醚預(yù)處理誘導(dǎo)腦保護(hù)機制中發(fā)揮的作用。
　　實驗一:腦缺血再灌注后5-LOX對MyD88依賴性NF-κB生成的影響
　　目的:探討中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)5-LOX對NF-κB生成的影響
　　方法:雄性成年SD大鼠30只,體重250~280g,采用隨機數(shù)字表法,將大鼠隨機分為3組(n=10):假手術(shù)組(S組)僅分離血管不進(jìn)行線栓栓塞;局灶性腦缺血再

5、灌注組(I/R組)采用線栓法制備MCAO模型,120min后拔出線栓,恢復(fù)再灌注;抑制劑組(B組)經(jīng)頸部血管給予2mg/kg的5-LOX抑制劑BW-B70C,30min后制備MCAO模型,120min后拔出線栓,恢復(fù)再灌注。再灌注24小時處死動物取腦分別采用Westernblot法和RT-PCR法測定測定5-LOX、MyD88及NF-κB的蛋白及mRNA的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:與S組比較I/R組、B組5-LOX、MyD88及NF-

6、κB的蛋白及mRNA的表達(dá)均顯著增高(P<0.05);與I/R組比較,B組5-LOX、MyD88及NF-κB的蛋白及mRNA的表達(dá)均顯著降低(P<0.05)。
　　結(jié)論:腦缺血再灌注后5-LOX參與了MyD88依賴性NF-κB的生成。
　　實驗二:探討5-LOX在異氟醚預(yù)處理誘導(dǎo)腦保護(hù)機制中的作用
　　目的:探討5-LOX在異氟醚預(yù)處理大鼠MCAO模型誘導(dǎo)腦保護(hù)機制中的作用。
　　方法:雄性SD大鼠39只,體重2

7、50~280g,采用隨機數(shù)字表法,將大鼠隨機分為3組(n=13):假手術(shù)組(S組)僅分離血管不進(jìn)行線栓栓塞;局灶性腦缺血再灌注組(I/R組)采用線栓法制備MCAO模型,120min后拔出線栓,恢復(fù)再灌注;異氟醚預(yù)處理組(I組)2％異氟醚預(yù)處理2h,24h后制備MCAO模型120min后拔出線栓,恢復(fù)再灌注。再灌注24h后進(jìn)行神經(jīng)功能缺陷評分,隨后處死,冰上取腦在腦槽中切片行TTC染色測量腦梗死體積,并采用RT-PCR和Western b

8、lot分別檢測5-LOX、MyD88和NF-κB的mRNA及其蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果:與S組比較,I/R及I組神經(jīng)功能缺陷評分升高,腦梗死體積增大,5-LOX、MyD88及NF-κB的mRNA和蛋白表達(dá)均顯著升高(P<0.05);與I/R組比較,I組神經(jīng)功能缺陷評分降低,腦梗死體積減小,5-LOX、MyD88及NF-κB的mRNA和蛋白表達(dá)均顯著降低(P<0.05)。
　　結(jié)論:異氟醚預(yù)處理可能通過下調(diào)5-LOX表達(dá),抑制