EGFR家族在喉鱗狀細(xì)胞癌中表達(dá)與協(xié)同表達(dá)及EGFR在cN-,0-期的意義.pdf

1、研究背景 喉癌是耳鼻咽喉科常見的惡性腫瘤，其中鱗狀細(xì)胞癌占全部喉癌的96％<'[1]>。目前喉癌發(fā)病率有明顯的增長趨勢，其原因除與臨床診斷技術(shù)的提高，·平均壽命的增加等因素有關(guān)外，可能與空氣污染的加重、吸煙、某些職業(yè)的長期接觸致癌物質(zhì)有關(guān)，這與喉癌的發(fā)病率城市高于農(nóng)村，空氣污染重的重工業(yè)城市高于污染輕的輕工業(yè)城市相符合。 喉癌占全身惡性腫瘤的5.7-7.6％，占耳鼻咽喉惡性腫瘤的7.9-35％<'[2]>。喉癌的分子生物學(xué)發(fā)病

2、機(jī)制目前尚不清楚，多數(shù)學(xué)者認(rèn)為，惡性腫瘤的發(fā)生是一個長期的多因素形成的分階段的過程。單個基因改變尚不足以造成細(xì)胞的完全惡化。要使細(xì)胞完全惡性轉(zhuǎn)化，需要多個基因的改變。喉癌的發(fā)生與原癌基因激活、抑癌基因失活，以及凋亡相關(guān)因子密切相關(guān)，并傾向于認(rèn)為癌腫是一種基因病。在人體細(xì)胞中存在著多種原癌基因，它是人類細(xì)胞遺傳密碼的一部分，編碼特異性酶、膜受體以及細(xì)胞生長和發(fā)育有關(guān)的生長因子。正常情況下，這些原癌基因不表達(dá)或低度表達(dá)。在致癌物質(zhì)的作用下，

3、發(fā)生癌基因的活化、點(diǎn)突變，并引起癌基因的異常表達(dá)，抑或?qū)е乱职┗虻膩G失與失活，最終引起細(xì)胞的癌變。 近年來，放療、化療以及為保護(hù)喉器官功能的保守性手術(shù)，在一定程度上改善了喉鱗狀細(xì)胞癌患者的生存質(zhì)量。但是近30年中，喉癌是為數(shù)不多的五年生存率沒有增加的惡性腫瘤<'[3]>。既往的研究以及本實(shí)驗(yàn)結(jié)果均表明，喉鱗狀細(xì)胞癌中，EGFR受體家族在癌腫發(fā)病中可能存在一定的作用。逐漸增多的研究也證實(shí)，喉鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展過程中，存在EGF

4、R受體家族原癌基因協(xié)同作用。因此，研究EGFR受體家族各成員間的協(xié)同表達(dá)，尤其在分子水平的研究，較單純對單個受體表達(dá)的研究，或許具有更加重要的意義<'[5]>。同時(shí)，通過這些分子生物學(xué)標(biāo)志物的研究，對喉鱗狀細(xì)胞癌患者的治療選擇以及預(yù)后的判斷，結(jié)合臨床1，通過對表皮生長因子受體家族成員在喉鱗狀細(xì)胞癌和喉良性增生性病變中表達(dá)的比較、及其與喉鱗狀細(xì)胞癌不同臨床病理特征相關(guān)性的分析，探討表皮生長因子受體家族成員單體及多聚體在喉鱗狀細(xì)胞癌發(fā)病機(jī)

5、制中的分子生物學(xué)作用。 2，通過對不同臨床病理特征對DFS、OS的影響，以及表皮生長因子受體家族成員表達(dá)與協(xié)同表達(dá)對DFS、OS影響的研究，探討表皮生長因子受體家族成員在喉鱗狀細(xì)胞癌中對判斷預(yù)后的價(jià)值，從而指導(dǎo)臨床治療。 方法：應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)法(RT-PCR)，從分子學(xué)水平，對36例不同臨床病理特征的喉鱗狀細(xì)胞癌病人標(biāo)本，11例良性增生性病變，其中6例喉不典型增生和5例喉乳頭狀瘤標(biāo)本，檢測表皮生長因子受體家族成員

6、EGFR、ErbB2、ErbB3、ErbB4mRNA的表達(dá)，以β-actin為內(nèi)參照，凝膠電泳圖通過Kodak凝膠分析系統(tǒng)，并應(yīng)用1D Image Analysis Software進(jìn)行基因表達(dá)強(qiáng)度分析。結(jié)果判斷以同時(shí)擴(kuò)增的β-actin表達(dá)強(qiáng)度為基準(zhǔn)，通過表達(dá)強(qiáng)度(相對系數(shù))=細(xì)胞因子A值/β-actin A值，計(jì)算不同表皮生長因子受體家族成員mRNA的表達(dá)強(qiáng)度。 對36例喉鱗狀細(xì)胞癌標(biāo)本，分別分析表皮生長因子受體家族成員mR

7、NA的表達(dá)強(qiáng)度與不同臨床病理特征(年齡、性別、病變部位、TNM分期、T分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級等)的相關(guān)性；對36例喉鱗狀細(xì)胞癌病人中的14例，分別檢測癌組織和癌旁正常粘膜組織標(biāo)本中的表皮生長因子受體家族成員mRNA的表達(dá)強(qiáng)度，并對癌組織與癌旁組織中四個因子mRNA的表達(dá)強(qiáng)度進(jìn)行對比分析。對36例喉鱗狀細(xì)胞癌患者，分析表皮生長因子受體家族成員的基因表達(dá)與協(xié)同表達(dá)對DFS、OS的影響。以上數(shù)據(jù)采用SPSSl3.0的卡方檢驗(yàn)和生存分析法

8、(cox regression and Kaplan-Meier survival analysis)。 結(jié)果： 1，喉鱗狀細(xì)胞癌、不典型增生和乳頭狀瘤EGFR受體家族mRNA表達(dá)比較：EGFR mRNA過度表達(dá)陽性率分別為72.2％、33.3％、20％，三者之間過度表達(dá)陽性率存在顯著差異(P<0.01)；ErbB2 mRNA過度表達(dá)陽性率分別為77.8％、33.3％、20％，三者之間過度表達(dá)陽性率具有顯著差異(

9、P<0.01)；ErbB3 mRNA過度表達(dá)陽性率分別為66.7％、16.7％、20％，三者之間亦具有顯著性差異(p<0.01)；ErbB4 mRNA過度表達(dá)陽性率分別為19.4％、16.7％、0，三者之間沒有顯著差異(p>0.05)。 2，喉鱗狀細(xì)胞癌與癌旁正常粘膜EGFR家族mRNA過度表達(dá)的比較：喉鱗癌組織與癌旁正常粘膜EGFR、ErbB2、ErbB3與 ErbB4mRNA 過度表達(dá)無顯著性差異(p>0.05)。

10、3，喉鱗狀細(xì)胞癌EGFR受體家族mRNA過度表達(dá)與臨床病理特征的相關(guān)性：除EGFR mRNA與喉鱗狀細(xì)胞癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移存在相關(guān)性外(p<0.05 )，EGFR受體家族mRNA表達(dá)強(qiáng)度與各臨床病理特征，包括年齡、性別、病變部位、分化程度、TNM分期、T分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，均呈現(xiàn)無顯著相關(guān)性(p>0.05)。 4，喉鱗狀細(xì)胞癌EGFR受體家族各成員之間mRNA表達(dá)：EGFR與ErbB2，EGFR與ErbB3，ErbB2與ErbB3的mR

11、NA表達(dá)存在顯著相關(guān)性(p<0.01)，而其他成員mRNA的表達(dá)與ErbB4 mRNA表達(dá)無顯著相關(guān)性(p>0.05)。 5，喉鱗狀細(xì)胞癌EGFR受體家族mRNA過度表達(dá)、協(xié)同表達(dá)與DFS、OS的相關(guān)性：單變量分析表明，除ErbB4 mRNA過度表達(dá)與DFS、OS無明顯相關(guān)性外(p>0.05)，EGFR、ErbB2、ErbB3 mRNA過度表達(dá)與縮短的DFS、OS存在明顯相關(guān)性(p<0.05)。除EGFR/ErbB2/ErbB3

12、協(xié)同表達(dá)與縮短的DFS、OS存在明顯相關(guān)性外，EGFR家族成員所形成的二聚體或多聚體與DFS、OS無顯著性相關(guān)性。COX多變量分析表明，EGFR、ErbB2和ErbB3 mRNA表達(dá)水平對DFS、OS具有獨(dú)立的預(yù)后作用(p<0.05)。 結(jié)論 1，EGFR受體家族mRNA的過度表達(dá)以及協(xié)同表達(dá)在喉鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生和發(fā)展中具有一定的作用，不同的受體以及多聚體在喉鱗狀細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展中具有不同的作用。癌旁組織EGFR家族mRN

13、A過度表達(dá)可能在癌腫的復(fù)發(fā)起著一定的作用。EGFR、ErbB2和ErbB3 mRNA協(xié)同表達(dá)與癌腫的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，因此研究EGFR家族成員協(xié)同表達(dá)與癌腫的相關(guān)性較單體的研究或許可提供更加準(zhǔn)確的信息。 2，EGFR受體家族mRNA作為分子學(xué)生物標(biāo)志物，其單體表達(dá)、協(xié)同表達(dá)與喉鱗狀細(xì)胞癌縮短的DFS、OS具有一定的相關(guān)性，而且EGFR、ErbB2和ErbB3mRNA具有獨(dú)立的預(yù)后價(jià)值，對于喉鱗狀細(xì)胞癌治療方案的選擇具有重要的指導(dǎo)