EGFR家族在喉鱗狀細胞癌中表達與協(xié)同表達及EGFR在cN-,0-期的意義.pdf

1、研究背景 喉癌是耳鼻咽喉科常見的惡性腫瘤，其中鱗狀細胞癌占全部喉癌的96％<'[1]>。目前喉癌發(fā)病率有明顯的增長趨勢，其原因除與臨床診斷技術(shù)的提高，·平均壽命的增加等因素有關(guān)外，可能與空氣污染的加重、吸煙、某些職業(yè)的長期接觸致癌物質(zhì)有關(guān)，這與喉癌的發(fā)病率城市高于農(nóng)村，空氣污染重的重工業(yè)城市高于污染輕的輕工業(yè)城市相符合。 喉癌占全身惡性腫瘤的5.7-7.6％，占耳鼻咽喉惡性腫瘤的7.9-35％<'[2]>。喉癌的分子生物學(xué)發(fā)病

2、機制目前尚不清楚，多數(shù)學(xué)者認為，惡性腫瘤的發(fā)生是一個長期的多因素形成的分階段的過程。單個基因改變尚不足以造成細胞的完全惡化。要使細胞完全惡性轉(zhuǎn)化，需要多個基因的改變。喉癌的發(fā)生與原癌基因激活、抑癌基因失活，以及凋亡相關(guān)因子密切相關(guān)，并傾向于認為癌腫是一種基因病。在人體細胞中存在著多種原癌基因，它是人類細胞遺傳密碼的一部分，編碼特異性酶、膜受體以及細胞生長和發(fā)育有關(guān)的生長因子。正常情況下，這些原癌基因不表達或低度表達。在致癌物質(zhì)的作用下，

3、發(fā)生癌基因的活化、點突變，并引起癌基因的異常表達，抑或?qū)е乱职┗虻膩G失與失活，最終引起細胞的癌變。 近年來，放療、化療以及為保護喉器官功能的保守性手術(shù)，在一定程度上改善了喉鱗狀細胞癌患者的生存質(zhì)量。但是近30年中，喉癌是為數(shù)不多的五年生存率沒有增加的惡性腫瘤<'[3]>。既往的研究以及本實驗結(jié)果均表明，喉鱗狀細胞癌中，EGFR受體家族在癌腫發(fā)病中可能存在一定的作用。逐漸增多的研究也證實，喉鱗狀細胞癌的發(fā)生發(fā)展過程中，存在EGF

4、R受體家族原癌基因協(xié)同作用。因此，研究EGFR受體家族各成員間的協(xié)同表達，尤其在分子水平的研究，較單純對單個受體表達的研究，或許具有更加重要的意義<'[5]>。同時，通過這些分子生物學(xué)標(biāo)志物的研究，對喉鱗狀細胞癌患者的治療選擇以及預(yù)后的判斷，結(jié)合臨床1，通過對表皮生長因子受體家族成員在喉鱗狀細胞癌和喉良性增生性病變中表達的比較、及其與喉鱗狀細胞癌不同臨床病理特征相關(guān)性的分析，探討表皮生長因子受體家族成員單體及多聚體在喉鱗狀細胞癌發(fā)病機

5、制中的分子生物學(xué)作用。 2，通過對不同臨床病理特征對DFS、OS的影響，以及表皮生長因子受體家族成員表達與協(xié)同表達對DFS、OS影響的研究，探討表皮生長因子受體家族成員在喉鱗狀細胞癌中對判斷預(yù)后的價值，從而指導(dǎo)臨床治療。 方法：應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)法(RT-PCR)，從分子學(xué)水平，對36例不同臨床病理特征的喉鱗狀細胞癌病人標(biāo)本，11例良性增生性病變，其中6例喉不典型增生和5例喉乳頭狀瘤標(biāo)本，檢測表皮生長因子受體家族成員

6、EGFR、ErbB2、ErbB3、ErbB4mRNA的表達，以β-actin為內(nèi)參照，凝膠電泳圖通過Kodak凝膠分析系統(tǒng)，并應(yīng)用1D Image Analysis Software進行基因表達強度分析。結(jié)果判斷以同時擴增的β-actin表達強度為基準，通過表達強度(相對系數(shù))=細胞因子A值/β-actin A值，計算不同表皮生長因子受體家族成員mRNA的表達強度。 對36例喉鱗狀細胞癌標(biāo)本，分別分析表皮生長因子受體家族成員mR

7、NA的表達強度與不同臨床病理特征(年齡、性別、病變部位、TNM分期、T分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級等)的相關(guān)性；對36例喉鱗狀細胞癌病人中的14例，分別檢測癌組織和癌旁正常粘膜組織標(biāo)本中的表皮生長因子受體家族成員mRNA的表達強度，并對癌組織與癌旁組織中四個因子mRNA的表達強度進行對比分析。對36例喉鱗狀細胞癌患者，分析表皮生長因子受體家族成員的基因表達與協(xié)同表達對DFS、OS的影響。以上數(shù)據(jù)采用SPSSl3.0的卡方檢驗和生存分析法

8、(cox regression and Kaplan-Meier survival analysis)。 結(jié)果： 1，喉鱗狀細胞癌、不典型增生和乳頭狀瘤EGFR受體家族mRNA表達比較：EGFR mRNA過度表達陽性率分別為72.2％、33.3％、20％，三者之間過度表達陽性率存在顯著差異(P<0.01)；ErbB2 mRNA過度表達陽性率分別為77.8％、33.3％、20％，三者之間過度表達陽性率具有顯著差異(

9、P<0.01)；ErbB3 mRNA過度表達陽性率分別為66.7％、16.7％、20％，三者之間亦具有顯著性差異(p<0.01)；ErbB4 mRNA過度表達陽性率分別為19.4％、16.7％、0，三者之間沒有顯著差異(p>0.05)。 2，喉鱗狀細胞癌與癌旁正常粘膜EGFR家族mRNA過度表達的比較：喉鱗癌組織與癌旁正常粘膜EGFR、ErbB2、ErbB3與 ErbB4mRNA 過度表達無顯著性差異(p>0.05)。

10、3，喉鱗狀細胞癌EGFR受體家族mRNA過度表達與臨床病理特征的相關(guān)性：除EGFR mRNA與喉鱗狀細胞癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移存在相關(guān)性外(p<0.05 )，EGFR受體家族mRNA表達強度與各臨床病理特征，包括年齡、性別、病變部位、分化程度、TNM分期、T分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，均呈現(xiàn)無顯著相關(guān)性(p>0.05)。 4，喉鱗狀細胞癌EGFR受體家族各成員之間mRNA表達：EGFR與ErbB2，EGFR與ErbB3，ErbB2與ErbB3的mR

11、NA表達存在顯著相關(guān)性(p<0.01)，而其他成員mRNA的表達與ErbB4 mRNA表達無顯著相關(guān)性(p>0.05)。 5，喉鱗狀細胞癌EGFR受體家族mRNA過度表達、協(xié)同表達與DFS、OS的相關(guān)性：單變量分析表明，除ErbB4 mRNA過度表達與DFS、OS無明顯相關(guān)性外(p>0.05)，EGFR、ErbB2、ErbB3 mRNA過度表達與縮短的DFS、OS存在明顯相關(guān)性(p<0.05)。除EGFR/ErbB2/ErbB3

12、協(xié)同表達與縮短的DFS、OS存在明顯相關(guān)性外，EGFR家族成員所形成的二聚體或多聚體與DFS、OS無顯著性相關(guān)性。COX多變量分析表明，EGFR、ErbB2和ErbB3 mRNA表達水平對DFS、OS具有獨立的預(yù)后作用(p<0.05)。 結(jié)論 1，EGFR受體家族mRNA的過度表達以及協(xié)同表達在喉鱗狀細胞癌的發(fā)生和發(fā)展中具有一定的作用，不同的受體以及多聚體在喉鱗狀細胞癌發(fā)生發(fā)展中具有不同的作用。癌旁組織EGFR家族mRN

13、A過度表達可能在癌腫的復(fù)發(fā)起著一定的作用。EGFR、ErbB2和ErbB3 mRNA協(xié)同表達與癌腫的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，因此研究EGFR家族成員協(xié)同表達與癌腫的相關(guān)性較單體的研究或許可提供更加準確的信息。 2，EGFR受體家族mRNA作為分子學(xué)生物標(biāo)志物，其單體表達、協(xié)同表達與喉鱗狀細胞癌縮短的DFS、OS具有一定的相關(guān)性，而且EGFR、ErbB2和ErbB3mRNA具有獨立的預(yù)后價值，對于喉鱗狀細胞癌治療方案的選擇具有重要的指導(dǎo)