2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:觀察高同型半胱氨酸(Hcy)與高糖單獨(dú)或聯(lián)合應(yīng)用對小鼠足細(xì)胞凋亡及其PKC活性、podocinmRNA表達(dá)的影響,探討高糖、高同型半胱氨酸對足細(xì)胞損傷的作用機(jī)制。
  方法:
  1.將小鼠足細(xì)胞孵育于含50U/mLγ-干擾素,100U/ml青霉素,100μg/ml鏈霉素,10%(體積分?jǐn)?shù))胎牛血清的1640培養(yǎng)液中,33℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)傳代,然后將細(xì)胞轉(zhuǎn)入不含γ-干擾素的10%胎牛血清1640培養(yǎng)液,37℃培養(yǎng)箱中

2、誘導(dǎo)分化10~14d,倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)。
  2.將分化成熟的足細(xì)胞于不含胎牛血清的1640培養(yǎng)液中同步培養(yǎng)24h,隨機(jī)分為①對照組:正常對照組(5mmol/L葡萄糖)、高滲對照組(5mmol/L葡萄糖+20mmol/L甘露醇);②損傷組:高Hcy組(1mmol/L的Hcy)、高糖組(25mmol/L葡萄糖)、混合組(1mmol/L的Hcy+25mmol/L葡萄糖);③PKC抑制劑組:高Hcy+白屈菜紅堿(10-5mmol

3、/L)、高糖+白屈菜紅堿(10-5mmol/L)、高Hcy+高糖+白屈菜紅堿(10-5mmol/L);各組細(xì)胞繼續(xù)孵育24、48、72h,通過倒置顯微鏡觀察細(xì)胞生長狀態(tài);分別收集細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡,ELISA法檢測各組PKC活性,RT-PCR法檢測podocinmRNA表達(dá)。
  結(jié)果:
  1.正常組與高滲組相比,凋亡率、PKC活性及podocinmRNA表達(dá)差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。細(xì)胞孵育24h時,各組細(xì)胞未見到明

4、顯的細(xì)胞凋亡,凋亡率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);48h時,高Hcy、高糖、混合組細(xì)胞凋亡率分別為(13.42±1.35)%、(12.98±1.02)%、(20.72±0.36)%,較正常組升高(P<0.05),混合組細(xì)胞凋亡更加明顯(P<0.01);72h時,上述3組細(xì)胞凋亡較48h更加明顯(P<0.05),凋亡率分別為(20.27±1.80)%、(21.49±1.20)%、(27.77±1.81)%;高Hcy組、高糖組和混合組細(xì)

5、胞孵育24h時,PKC活性較正常組升高(P<0.05),PodocinmRNA表達(dá)相比正常對照組降低(P<0.05),混合組更為明顯(P<0.01),隨著時間推移,48、72h時,上述差異更為明顯(P<0.05)。
  2.抑制劑組細(xì)胞孵育24h時,各組細(xì)胞凋亡率較對應(yīng)的損傷組,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),48h時,高Hcy、高糖、混合組細(xì)胞凋亡率分別為(10.10±1.57)%、(10.33±1.98)%、(16.99±2

6、.44)%,較對應(yīng)的損傷組降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),72h仍有上述差異;24h時,podocinmRNA表達(dá)較對應(yīng)的損傷組增高(P<0.05),72h仍有上述差異。
  結(jié)論:
  1.高Hcy和高糖均可誘導(dǎo)小鼠足細(xì)胞凋亡,且具有一定的時效性,二者共同作用較單獨(dú)作用時更強(qiáng),高Hcy可加重高糖對足細(xì)胞的促凋亡作用;
  2.高Hcy和高糖可下調(diào)podocinmRNA的表達(dá),且二者具有疊加效應(yīng),作用呈時間依賴

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