褐飛虱鞘脂質(zhì)代謝酶microRNA的鑒定及其功能研究.pdf

1、褐飛虱Nilaparvata lugens Stal是水稻重要害蟲，主要取食水稻韌皮部，造成葉片葉綠素減少，根部腐爛，植株發(fā)黃形成“虱燒”，稻飛虱還能傳播多種水稻病毒，不僅造成水稻產(chǎn)量損失，更危害生態(tài)環(huán)境的健康持續(xù)發(fā)展。MicroRNA(miRNA)是新近發(fā)現(xiàn)并引起廣泛關(guān)注的一類非編碼小RNA分子，能調(diào)控靶基因，引起靶基因的翻譯抑制或mRNA降解，通過本研究鑒定了十種miRNAs，并對其中兩條進行了相關(guān)的功能研究。
　　1.通過S

2、tem-loop RT-PCR驗證miR-279、miR-106-5p、miR-162-3p、miR-184-3p、miR-20-5p、miR-222-3p、miR-226-3p、miR-30-5p、miR-33-5p、mir-60-5p十種miRNA，檢測其分別在褐飛虱各個時期的表達量。
　　2.用miRNA功能分析工具miR antagomir和miR agomir對miR-279和miR-184-3p進行抑制和過表達。并對預

3、測到的靶基因SMS和SMPD4的進行檢測。結(jié)果表明miR-279能調(diào)控SMS的轉(zhuǎn)錄水平。而miR-184-3p對SMPD4的轉(zhuǎn)錄沒有影響。
　　3.用HPLC-MS測定經(jīng)miR antagomir和miRagomir處理后的褐飛虱體內(nèi)鞘脂質(zhì)組分和含量。發(fā)現(xiàn)經(jīng)antagomir-279或agomir-184-3p處理后，褐飛虱體內(nèi)鞘磷脂、神經(jīng)酰胺和其他幾種鞘脂質(zhì)的含量升高，褐飛虱體重下降。經(jīng)agomir-279或antagomir-