AngII及ROS對(duì)高血壓合并胰島素抵抗大鼠影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：(1)從血管緊張素Ⅱ（angiotensinⅡ，AngⅡ）/活性氧（reactive oxygen species，ROS)的角度解釋高血壓與胰島素抵抗之間的“紐帶”聯(lián)系機(jī)制;（2）為高血壓病的防治提供新的“靶點(diǎn)”和新思路。
　　方法：實(shí)驗(yàn)分為5個(gè)組：（1）模型組：10只自發(fā)性高血壓大鼠（spontaneously hypertensive rats，SHR）、（2）坎地沙坦高劑量組（10只SHR，坎地沙坦4mg.kg-1.

2、day-1）、（3）坎地沙坦低劑量組（10只SHR，坎地沙坦0.4mg.kg-1.day-1）、（4）對(duì)照組（10只Wistar大鼠）、（5）Tempol組（10只SHR，Tempol20μg.kg-1.day-1）。除對(duì)照組飲用自來(lái)水外，其余各組均飲用10％果糖水，各組于實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)灌胃給藥，每天1次，連續(xù)給藥8周，每4周測(cè)量一次血壓；實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，股動(dòng)脈放血法處死動(dòng)物，精密稱(chēng)取左心室重；游標(biāo)卡尺測(cè)量左心室厚度和主動(dòng)脈內(nèi)徑，主動(dòng)脈管壁厚度

3、；用血糖儀測(cè)量大鼠血糖；采用放免法檢測(cè)每只大鼠的胰島素(insulin，INS)水平和AngⅡ；ELISA法檢測(cè)主動(dòng)脈中ROS的含量；HE染色，觀察主動(dòng)脈病理組織學(xué)改變；免疫組化法檢測(cè)主動(dòng)脈中血管緊張素Ⅱ的1型受體（AngiotensinⅡtype1 receptor，AT1-R）、血管緊張素Ⅱ的2型受體（AngiotensinⅡ type2 receptor，AT2-R）表達(dá)；Western blot法檢測(cè)主動(dòng)脈中磷酸化的蛋白激酶B（

4、protein kinaseB，Akt）的表達(dá)；用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)主動(dòng)脈磷酸化Akt的mRNA的表達(dá)。
　　結(jié)果：（1）與對(duì)照組比較，模型組大鼠平均動(dòng)脈壓、血糖和INS均升高(P<0.01或 P<0.05)；與模型組比較，坎地沙坦高劑量組、坎地沙坦低劑量組和Tempol組大鼠平均動(dòng)脈壓、血糖和INS均降低(P<0.01或P<0.05)。（2）與對(duì)照組比較，模型組大鼠血漿AngⅡ增加(P<0.01)；與模型組比較，坎地沙坦高

5、劑量組，坎地沙坦低劑量組和Tempol組大鼠血漿AngⅡ沒(méi)有顯著變化，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。（3）與對(duì)照組比較，模型組大鼠主動(dòng)脈ROS含量升高(P<0.01)，經(jīng)過(guò)治療后，坎地沙坦高劑量組、坎地沙坦低劑量組和Tempol組大鼠與模型組大鼠比較，主動(dòng)脈ROS含量均降低(P<0.01或P<0.05)。（4）與對(duì)照組比較，模型組大鼠胰島素抵抗指數(shù)明顯升高(P<0.01)；與模型組比較，坎地沙坦高劑量組和Tempol組大鼠胰島素抵抗指數(shù)降低(P<0.0

6、1)。（5）與對(duì)照組比較，模型組大鼠的左心室重和左心室厚度明顯增厚(P<0.01)；與模型組比較，坎地沙坦高劑量組，坎地沙坦低劑量組和Tempol組大鼠的左心室重和左心室厚度明顯降低(P<0.01)。與對(duì)照組比較，模型組大鼠主動(dòng)脈內(nèi)徑和主動(dòng)脈管壁厚度增大(P<0.05)；與模型組比較，坎地沙坦高劑量組，坎地沙坦低劑量組和Tempol組大鼠主動(dòng)脈動(dòng)脈內(nèi)徑和主動(dòng)脈管壁厚度減小，其中坎地沙坦高劑量組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，Tempo

7、l組大鼠主動(dòng)脈動(dòng)脈內(nèi)徑差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。（6）光鏡下各組的病理變化：模型組的大鼠有主動(dòng)脈管壁輕度變性，主動(dòng)脈管壁明顯增厚，內(nèi)皮細(xì)胞脫落；坎地沙坦高劑量組的大鼠少數(shù)有主動(dòng)脈管壁輕度變性和主動(dòng)脈管壁輕度增厚，內(nèi)膜、中膜及外膜層次結(jié)構(gòu)接近正常；坎地沙坦低劑量組的大鼠主動(dòng)脈管壁輕度變性和主動(dòng)脈管壁輕度增厚；主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞脫落等的變化；Tempol組的大鼠主動(dòng)脈管壁輕度增厚，主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞脫落；對(duì)照組的大鼠主動(dòng)脈組織結(jié)構(gòu)接近正常，

8、內(nèi)膜、中膜及外膜層次結(jié)構(gòu)清楚。（7）與對(duì)照組比較，模型組大鼠的AT1-R平均光密度值明顯增大（P<0.01）；與模型組比較，坎地沙坦高劑量組、坎地沙坦低劑量組和Tempol組大鼠的AT1-R平均光密度值均降低（P<0.01）；而各組大鼠的AT2-R平均光密度值變化不明顯，沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。（8）與對(duì)照組比較，模型組大鼠的Akt的蛋白表達(dá)降低(P<0.01)，與模型組比較，坎地沙坦高劑量組、坎地沙坦低劑量組和Tempol組大鼠 Akt的蛋白

9、均升高(P<0.05)。（9）與對(duì)照組比較，模型組大鼠磷酸化Akt的mRNA表達(dá)顯著下降(P<0.01)；與模型組比較，坎地沙坦高劑量組，坎地沙坦低劑量組和Tempol組大鼠磷酸化Akt的mRNA表達(dá)增加，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論：（1）SHR大鼠給予果糖喂養(yǎng)，可成功建立高血壓合并胰島素抵抗的大鼠模型，該模型符合人類(lèi)高血壓合并胰島素抵抗的病理特點(diǎn)；（2）AT1受體阻斷藥與 ROS抑制藥在降低血壓的同時(shí)，還能減