大黃(庶蟲)蟲丸對(duì)胰島素抵抗大鼠內(nèi)皮功能及胰島素敏感性的影響.pdf

1、目的:本實(shí)驗(yàn)通過觀察大黃蜜蟲丸對(duì)胰島素抵抗大鼠內(nèi)皮功能及胰島素敏感性的影響,探討其防治胰島素抵抗的部分作用機(jī)制,為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　 隨著經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展、人們生活方式的轉(zhuǎn)變、人口老齡化及診斷技術(shù)的進(jìn)步,代謝綜合征(metabolic syndrome,MS)及其并發(fā)癥己成為嚴(yán)重威脅人類健康的公共衛(wèi)生問題。目前普遍認(rèn)為,胰島素抵抗(insulin resistance,IR)是多種疾病,特別是MS及心血管疾病共同的危險(xiǎn)因

2、素,是滋生多種代謝相關(guān)疾病的“共同土壤”。研究發(fā)現(xiàn),高脂肪飲食會(huì)導(dǎo)致IR,高脂飼料喂養(yǎng)可以在引起大鼠肥胖的同時(shí)導(dǎo)致胰島素敏感性下降,本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用李光偉教授提出的胰島素敏感指數(shù)(insulin sensitivity index,ISI)來評(píng)價(jià)胰島素抵抗機(jī)體胰島素敏感性的變化。
　　 近年來,血管內(nèi)皮細(xì)胞(vascular endothelial cell,VEC)功能與IR的關(guān)系正逐漸受到重視,并成為深刻揭示IR和MS本質(zhì)的一條新

3、的重要途徑,對(duì)心血管病及其它代謝相關(guān)疾病的發(fā)病機(jī)制將會(huì)帶來新的認(rèn)識(shí)及防治策略的革新。VEC是一個(gè)具有高度活性的代謝和分泌器官,它既是感應(yīng)細(xì)胞又是效應(yīng)細(xì)胞,能感知血液中的炎性信號(hào)、激素水平、切應(yīng)力、壓力等信息,同時(shí)通過釋放活性物質(zhì)對(duì)這些信息作出反應(yīng)。一氧化氮(nitric oxide,NO)是研究最為詳盡且被廣泛公認(rèn)的反映內(nèi)皮功能變化的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)之一,血管組織中NO重要的生理作用在于它改變血管的基礎(chǔ)張力,調(diào)節(jié)血壓和組織血流量,以及抑制血小

4、板的粘附、聚集,維持血流暢通。內(nèi)皮素(endothelin,ET)是迄今所知的體內(nèi)作用最強(qiáng)的縮血管多肽,對(duì)動(dòng)脈、靜脈、微血管和淋巴管皆有持續(xù)強(qiáng)烈的收縮作用。大量的研究表明,IR患者一般均伴有NO水平下降和ET水平增高,因此,血清中NO和ET含量變化是內(nèi)皮功能受損的一個(gè)標(biāo)志。
　　 氧化應(yīng)激也參與胰島素抵抗的發(fā)生,氧自由基不僅通過使生物膜中不飽和脂肪酸過氧化引起細(xì)胞損傷,而且還能通過脂質(zhì)過氧化物的分解產(chǎn)物引起細(xì)胞損傷。過氧化物歧化

5、酶(superoxide dismutase,SOD)是體內(nèi)非常重要的氧自由基清除劑,能保護(hù)細(xì)胞免受損傷,其活力的高低間接反應(yīng)了機(jī)體清除自由基的能力；丙二醛(malondialdehyde,MDA)是脂質(zhì)過氧化的代謝產(chǎn)物,其水平可反映機(jī)體脂質(zhì)過氧化損害程度。
　　 中醫(yī)上認(rèn)為肝失疏泄,脾失運(yùn)健,致氣滯血瘀痰阻,脂濁流溢皮下,積于脈道,瘀久化熱,久而氣血虧虛,出現(xiàn)肥胖、血脂紊亂、高血壓、糖尿病等,可見氣虛痰盛之人易患胰島素抵抗。大

6、黃蜜丸出自張仲景所著《金匱要略》,具有疏通經(jīng)絡(luò)、緩中補(bǔ)虛、滋陰養(yǎng)血之功效,用于治療五勞虛極,內(nèi)有干血之證。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用高脂飼料喂養(yǎng)的方法制造胰島素抵抗模型,并以血脂康作為陽性對(duì)照,通過觀察胰島素抵抗大鼠病理形態(tài)學(xué),測(cè)定空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、空腹血清胰島素(fasting insulin,FINS)、血清總膽固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyeride,TG)、

7、低密度蛋白膽固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)及血清NO、ET、SOD、MDA含量的變化,從胰島素敏感性、內(nèi)皮功能、氧化應(yīng)激等方面探討大黃蜜蟲丸對(duì)胰島素抵抗的作用機(jī)制,從而為大黃蜜蟲丸防治胰島素抵抗提供理論依據(jù)。
　　 方法:本實(shí)驗(yàn)選用8周齡雄性Wistar大鼠50只

8、,適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后,隨機(jī)將50只大鼠分為空白對(duì)照組(control group,C)、模型組(model group,M)、大黃蜜蟲丸低劑量組(low-dose Da Huang Zhe Chong Pill group,L)、大黃蜜蟲丸高劑量組(high-dose Da Huang Zhe Chong Pill group,H)和血脂康組(Xue Zhi Kang group,X)共5組,每組10只?？瞻讓?duì)照組:喂普通飼料,同時(shí)每天灌

9、胃蒸餾水(10ml/kg)；模型組:喂高脂飼料,同時(shí)每天灌胃蒸餾水(10ml/kg)；大黃蜜蟲丸低劑量組:喂高脂飼料,同時(shí)每天灌胃大黃蜜蟲丸水提物1g生藥/kg；大黃()蟲丸高劑量組:喂高脂飼料,同時(shí)每天灌胃大黃蜜蟲丸水提物2g生藥/kg；血脂康組:喂高脂飼料,同時(shí)每天灌胃血脂康0.2 g/Kg。連續(xù)喂養(yǎng)8周,然后斷頭取血,測(cè)定血清血糖、血脂、血胰島素、NO、ET、SOD、MDA含量,保留胸主動(dòng)脈,光鏡下觀察VEC的變化。
　　

10、 結(jié)果:1大黃蜜蟲丸對(duì)IR大鼠胰島素敏感性的影響:高脂飼料喂養(yǎng)大鼠8周后,模型組大鼠血清FBG、FINS、HOMA-IR水平明顯高于空白對(duì)照組(p<0.01),ISI顯著低于空白對(duì)照組(P<0.05),這表明給予高脂飲食8周后,胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)建成,造模成功。
　　 大黃蜜蟲丸低劑量組、高劑量組與模型組比較FBG顯著降低(P<0.01),低、高劑量組之間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,低劑量組與血脂康組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,高劑量組與血脂康組比較顯

11、著降低(P<0.05)。提示大黃蜜蟲丸可以降低IR大鼠FBG水平,且高劑量效果優(yōu)于血脂康。
　　 大黃蜜蟲丸低劑量組、高劑量組與模型組比較FINS顯著降低(P<0.01),低、高劑量組之間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,低、高劑量組與血脂康組比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。提示大黃蜜蟲丸可以降低IR大鼠FINS水平,且高劑量組有優(yōu)于低劑量組的趨勢(shì),但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 與空白對(duì)照組比較,模型組大鼠ISI顯著降低(P<0.05),說明IR大鼠胰島

12、素敏感性下降。大黃蜜蟲丸低劑量組、高劑量組與模型組比較ISI顯著升高(P<0.01),低、高劑量組之間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,低、高劑量組與血脂康組比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。提示大黃()蟲丸可以改善IR大鼠胰島素敏感性,且高劑量組有優(yōu)于低劑量組的趨勢(shì),但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與血脂康組比較,大黃()蟲丸高劑量組有優(yōu)于血脂康的趨勢(shì),但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 2大黃蜜蟲丸對(duì)IR大鼠血脂水平(TC、TG、HDL-C、LDL-C)的影響:與空白對(duì)照組比較,模

13、型組大鼠TC顯著升高,TG、LDL-C顯著升高(P<0.01),HDL-C顯著降低(P<0.01),說明IR大鼠血脂受到影響。大黃蜜蟲丸低劑量組與模型組比較TC、TG、LDL-C顯著降低(P<0.01),HDL-C顯著升高(P<0.01)；大黃蜜蟲丸高劑量組與模型組比較TC顯著降低,TG、LDL-C顯著降低(P<0.01),HDL-C顯著升高(P<0.01)。大黃蜜蟲丸低、高劑量組之間比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,低、高劑量組與血脂康組比較均無統(tǒng)

14、計(jì)學(xué)差異。提示大黃蜜蟲丸可以降低IR大鼠TC、TG、LDL-C水平,升高IR大鼠HDL-C水平,且高劑量組有優(yōu)于低劑量組的趨勢(shì),但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與血脂康組比較,大黃()蟲丸低、高劑量組均有優(yōu)于血脂康的趨勢(shì),但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 3大黃蜜蟲丸對(duì)IR大鼠血清NO、ET的影響:與空白對(duì)照組比較,模型組大鼠血清NO含量顯著下降,血清ET含量顯著升高,說明IR大鼠內(nèi)皮功能受損。大黃蜜蟲丸低劑量組與模型組比較血清NO含量顯著升高,血清ET

15、含量顯著降低；大黃蟲丸高劑量組與模型組比較血清NO含量顯著升高,血清ET含量顯著降低。大黃蜜蟲丸低、高劑量組之間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,低、高劑量組與血脂康組比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。提示大黃蜜蟲丸對(duì)IR大鼠有升高血清NO含量、降低ET含量的作用,從而提示大黃蜜蟲丸對(duì)IR大鼠具有一定的保護(hù)內(nèi)皮功能的作用,且高劑量組有優(yōu)于低劑量組的趨勢(shì),但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與血脂康組比較,大黃蟲丸低、高劑量組均有優(yōu)于血脂康的趨勢(shì),但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 4大黃蜜

16、蟲丸對(duì)IR大鼠血清SOD,MDA的影響:與空白對(duì)照組比較,模型組大鼠血清SOD含量顯著下降,血清MDA含量顯著升高,說明IR大鼠抗氧化體系受到影響,氧化應(yīng)激增加,自由基產(chǎn)生率大于清除率。大黃蜜蟲丸低劑量組、高劑量組與模型組比較血清SOD含量均顯著升高,血清MDA含量均顯著降低。大黃蜜蟲丸低、高劑量組之間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,低、高劑量組與血脂康組比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。提示該藥物具有一定的抗氧化作用和清除自由基的能力,且高劑量組有優(yōu)于低劑量組的

17、趨勢(shì),但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 5光鏡下觀察主動(dòng)脈形態(tài):HE染色光鏡觀察可見,空白對(duì)照組主動(dòng)脈血管壁光滑,厚度適中,內(nèi)膜完整,內(nèi)膜及中層細(xì)胞排列規(guī)則,內(nèi)彈力板完整清晰,中膜血管平滑肌細(xì)胞排列整齊,細(xì)胞呈梭形,大小一致,外膜未見異常；模型組主動(dòng)脈內(nèi)膜明顯增厚,突向管腔,內(nèi)皮呈不連續(xù)性脫失,中層平滑肌形態(tài)多樣,排列紊亂,細(xì)胞排列疏松,間隙增寬,可見向內(nèi)膜遷移的平滑肌細(xì)胞,內(nèi)皮下層及中膜層可見泡沫細(xì)胞,外膜未見明顯異常；大黃蜜蟲丸低劑量

18、組和大黃蜜蟲丸高劑量組主動(dòng)脈均未見內(nèi)膜明顯增厚及內(nèi)皮細(xì)胞明顯增多,細(xì)胞排列尚規(guī)整,內(nèi)膜下及中膜未見泡沫細(xì)胞,外膜未見異常；血脂康組主動(dòng)脈內(nèi)膜未見明顯增厚,內(nèi)皮細(xì)胞未見明顯增多,細(xì)胞排列尚規(guī)整,內(nèi)膜下及中膜未見泡沫細(xì)胞,外膜未見異常。
　　 結(jié)論:1大黃()蟲丸能提高胰島素抵抗大鼠的胰島素敏感性,從而改善胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)。
　　 2大黃()蟲丸能調(diào)節(jié)胰島素抵抗大鼠的血脂異常,改善脂代謝紊亂。
　　 3大黃()蟲丸能保