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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
揭示DNA甲基化,在寧夏回漢族人群中動(dòng)脈粥樣硬化(AS)發(fā)生發(fā)展過(guò)程中出現(xiàn)的異常改變,建立回漢族兩民族之間,AS的特異性DNA甲基化譜,探索特異性DNA甲基化譜,在回漢人群中,對(duì)AS的早期風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估及預(yù)測(cè)作用,為早期預(yù)防、診斷及治療AS提供新思路及線(xiàn)索。
方法:
研究對(duì)象:寧夏回漢AS和正常健康人群,年齡30-65歲;收集標(biāo)本時(shí)間:2013年1月至2014年2月;收集標(biāo)本地點(diǎn):寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院心內(nèi)科
2、和體檢部。標(biāo)本采集及檢測(cè):空腹采集足夠的靜脈血液,分離血漿和血細(xì)胞,生化分析儀檢測(cè)血漿中的TG、TC、HDL和LDL,血細(xì)胞用于提取DNA和RNA,檢測(cè)外周血細(xì)胞DNA甲基化及其mRNA表達(dá);研究對(duì)象分組標(biāo)準(zhǔn):臨床指征和血脂水平作為輔助診斷,頸動(dòng)脈多普勒超聲確診AS斑塊存在的人群,分為AS組,跟據(jù)民族,分為回族AS組和漢族AS組;頸動(dòng)脈多普勒超聲確診無(wú)內(nèi)膜增厚和斑塊形成的人群,作為正對(duì)常對(duì)照組,根據(jù)民族,分為回族正常對(duì)照組和漢族正常對(duì)照
3、組;總共四組,每組的樣本各50例,提取每組外周血樣本的DNA和RNA進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn),將從樣本中提取的DNA進(jìn)行重亞硫酸鹽修飾,用ntMS-PCR檢測(cè)篩選的11個(gè)基因的啟動(dòng)子區(qū)甲基化水平,用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)建譜基因的mRNA相對(duì)表達(dá)水平,探討這兩民族AS的DNA甲基化是否存在差異以及和基因表達(dá)的關(guān)系,經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)分析,篩選出特異性和敏感性較高的基因,作為研究目標(biāo),建立回漢族AS特異性DNA甲基化譜,評(píng)價(jià)DNA甲基化譜,在回漢族AS疾病,
4、早期分子生物學(xué)標(biāo)志物預(yù)測(cè)及診斷價(jià)值。
結(jié)果:
結(jié)果顯示,LCAT、PPARα、TIMP-1、ICAM1和ABCA1這五個(gè)基因的甲基化程度,在回族AS組和回族對(duì)照組間,有著明顯差異(P<0.05);PPARα、TIMP-1和ABCA1三個(gè)基因甲基化程度,在漢族AS組和漢族AS組對(duì)照組間,有差異(P<0.05);結(jié)果還顯示,LCAT、PPARα、TIMP-1和ABCA1,在回族AS人群中,具有較好的診斷價(jià)值(P<0.05
5、);在漢族AS人群中,只有TIMP-1具有診斷價(jià)值,如果將LCAT、PPARα、TIMP-1和ABCA1這四個(gè)基因聯(lián)合檢測(cè)AS,則預(yù)測(cè)回族AS的靈敏度和特異度達(dá)到86.1%和88.1%,聯(lián)合診斷價(jià)值達(dá)到0.923,這一結(jié)果說(shuō)明建立及應(yīng)用DNA甲基化譜在預(yù)測(cè)早期回族AS的發(fā)生及發(fā)展有意義。
結(jié)論:
1.回族AS組和回族對(duì)照組相比較,LCAT、PPARα、TIMP-1、ICAM1和ABCA1五個(gè)基因甲基化改變有顯著差異。
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