大黃酚微囊的制備及其兔體內(nèi)生物利用度研究.pdf

1、目的：中藥大黃(Rhubarb)具有抗高血脂肪癥、降低血壓、抗菌、抗腫瘤、瀉下等功效。其所含成分為總蒽醌衍生物，如大黃酸、蘆薈大黃素、大黃酚和大黃素甲醚，其中大黃酚(Chrysophanol,Chry)是產(chǎn)生藥理作用主要有效成分之一，化學(xué)名為1,8-二羥基-3-甲基蒽醌。大黃酚具有抗菌、縮短血液凝固時(shí)間、興奮神經(jīng)、麻痹肌肉、止咳、利尿、抗癌作用，特別是近年來(lái)研究表明，大黃酚能延緩衰老，能清除氧自由基，增強(qiáng)抗氧化能力和改善學(xué)習(xí)記憶障礙等作

2、用。但是大黃酚具有味苦、難溶于水、理化性質(zhì)不穩(wěn)定，遇光易氧化，對(duì)胃有一定的刺激性等不利因素。目前有關(guān)大黃酚研究仍停留在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)階段，并且給藥途徑也僅限于靜脈注射。因此我們開(kāi)始著手于改善大黃酚上述缺點(diǎn)的研究。 微囊是近40年來(lái)應(yīng)用于藥物的新工藝、新技術(shù)，其制備過(guò)程通稱(chēng)微型包囊術(shù)，簡(jiǎn)稱(chēng)微囊化，系利用天然的或合成的高分子材料(囊材)做為囊膜壁殼，將固態(tài)藥物或液態(tài)藥物(囊心物)包裹而成藥庫(kù)型的微囊。 藥物微囊化后，不但可以掩蓋藥

3、物的不良?xì)馕?、提高藥物的穩(wěn)定性，防止藥物在胃內(nèi)失活或減少對(duì)胃的刺激，可進(jìn)一步制成其他劑型，如散劑、片劑、顆粒劑、膠囊劑和注射劑等，還可制備成緩釋或控釋制劑，可使藥物濃集于靶區(qū)，提高療效，降低藥物的毒副作用。因此微囊在改善給藥方式、降低不良反應(yīng)等方面具有重大意義。 有關(guān)大黃酚微囊(Chrysophanol microcapsule，Chry)的制備及生物利用度研究國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)報(bào)道。 本實(shí)驗(yàn)采用微囊化技術(shù)，運(yùn)用復(fù)凝聚法制備大

4、黃酚微囊，可防止大黃酚氧化，提高其穩(wěn)定性；有效掩蓋其苦味，并且可以為大黃酚的臨床應(yīng)用提供藥理學(xué)依據(jù)。本實(shí)驗(yàn)還對(duì)大黃酚微囊的體外溶出度和體內(nèi)生物利用度進(jìn)行了研究。 方法： 1.大黃酚微囊制備工藝研究：本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)影響微囊質(zhì)量的三個(gè)主要因素進(jìn)行考察，即A(囊心囊材比)、B(成囊溫度)與C(攪拌速度)，并采用正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)的方法制備大黃酚微囊，以確定微囊制備的最佳工藝。 2微囊質(zhì)量控制：用光學(xué)顯微鏡觀測(cè)Chry M的形狀

5、和粒徑。 3微囊含量及溶出度測(cè)定方法的建立：本實(shí)驗(yàn)采用UV法測(cè)定大黃酚微囊的含量，并對(duì)大黃酚及其微囊的溶出度進(jìn)行考察。 4 大黃酚及大黃酚微囊血藥濃度及生物利用度的測(cè)定方法：運(yùn)用反相高效液相色譜法(RP-HPLC法)測(cè)定兔體內(nèi)的血藥濃度，并對(duì)微囊相對(duì)生物利用度進(jìn)行分析。 實(shí)驗(yàn)分組：取健康家兔12只，體重約1.8～2.5kg，隨機(jī)分成2組：大黃酚組和微囊組。分別灌胃給予Chry(50mg.kg-1)，和Chry M

6、(相當(dāng)于50mg·kg-1大黃酚)，然后于給藥前、給藥后0.5，1，1.5，2，3，4，5，6，8，10，12h頸動(dòng)脈插管取血1ml，按照RP-HPLC法測(cè)定家兔體內(nèi)大黃酚的血藥濃度。 結(jié)果： 1.大黃酚微囊制備工藝：實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的A(囊心物：囊材)、B(攪拌速度)、C(成囊溫度)三因素均影響微囊的包封率，其極差R分別是20.46、19.02、14.85。某因素的極差大，就表明該因素對(duì)試驗(yàn)的指標(biāo)影響大。因此由包封率確定的最佳

7、工藝為A3B2C3，即囊心物：囊材宜選1:4，攪拌速度200r.min-1，成囊溫度為40℃。由方差分析結(jié)果可知A、B、C三因素的F值分別是48.68、41.76、22.64，均比F0.05(2,2)=19.00大，表明A、B、C三因素對(duì)微囊包封率影響較大，存在顯著性差異，并且三因素影響包封率的順序是囊心物：囊材＞攪拌速度＞成囊溫度，與直觀分析結(jié)果一致。 2微囊質(zhì)量控制：于光學(xué)顯微鏡下(10×40倍)觀察，發(fā)現(xiàn)藥物晶型及大小已發(fā)生了改變

8、。微囊呈球形或卵形實(shí)體，囊粒大小均勻，邊緣清晰，無(wú)粘連或成團(tuán)現(xiàn)象。而大黃酚為較大的黃色柱狀結(jié)晶。用帶有標(biāo)尺的光學(xué)顯微鏡觀測(cè)600個(gè)大黃酚微囊的粒徑，按公式計(jì)算出大黃酚微囊平均粒徑(Dv)為9.00μm。 3.微囊含量及溶出度測(cè)定結(jié)果：以無(wú)水乙醇為溶劑在255nm測(cè)定微囊含量為16.13％，以0.5％十二烷基硫酸鈉的人工腸液為溶出介質(zhì)在255nm處測(cè)定大黃酚及其微囊溶出度，結(jié)果表明微囊可緩慢釋放大黃酚，延長(zhǎng)大黃酚的療效，降低大黃酚

9、對(duì)胃的刺激性，減少給藥次數(shù)，從而增加藥物的安全性。 4 家兔體內(nèi)大黃酚及大黃酚微囊血藥濃度及生物利用度的測(cè)定結(jié)果：以0.1％磷酸：甲醇(85:15)為流動(dòng)相、流速：0.8ml·min-1、檢測(cè)波長(zhǎng)：255nm、柱溫：30℃為色譜條件測(cè)定Chry和Chry M在家兔血藥濃度，并用3P97軟件進(jìn)行生物等效性分析。結(jié)果表明，大黃酚及其微囊在家兔體內(nèi)的藥物動(dòng)力學(xué)規(guī)律均以一室模型為最好。大黃酚微囊AUC0～∞為49.675μg.h.ml-

10、1大黃酚AUC0～∞為21.773μg.h.ml-1。以ChryAUC0～∞為參照，Chry M相對(duì)生物利用度為228.1％。表明大黃酚制成微囊后，能顯著提高大黃酚的穩(wěn)定性，并能提高其兔體內(nèi)生物利用度。結(jié)論： 1.微囊制備1.1采用復(fù)凝聚法制備大黃酚微囊方法易于掌握，簡(jiǎn)便可行，包封率良好，所得的微囊粒徑較小、均勻、質(zhì)量可靠、穩(wěn)定等。 1.2大黃酚被制成微囊后，可明顯提高大黃酚穩(wěn)定性，掩蓋其苦味，延長(zhǎng)其療效。 2分

11、析方法 2.1本實(shí)驗(yàn)采用紫外分光光度法測(cè)定微囊含量操作簡(jiǎn)單、快速、靈敏、準(zhǔn)確，方法可行。 2.2本實(shí)驗(yàn)建立的大黃酚微囊溶出度的測(cè)定方法結(jié)果可靠，與大黃酚微囊體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)具有良好的相關(guān)性。 2.3本實(shí)驗(yàn)建立RP-HPLC法測(cè)定家兔體內(nèi)大黃酚含量的方法靈敏度高、重現(xiàn)性好，可作為大黃酚體內(nèi)血藥濃度的測(cè)定方法。 3大黃酚及其微囊藥物動(dòng)力學(xué)、生物利用度的考察在家兔體內(nèi)藥物動(dòng)力學(xué)研究中，大黃酚及其微囊灌胃給藥符合一室模