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文檔簡介
1、目的:TDRG1基因是本課題組電子克隆的人睪丸特異表達基因。前期的研究提示該基因可能與睪丸腫瘤的發(fā)生發(fā)展相關(guān)，并利用RNA干擾技術(shù)(RNAi)成功在人睪丸生殖細胞腫瘤NTERA-2細胞中構(gòu)建了下調(diào)TDRG1基因mRNA表達的穩(wěn)定系統(tǒng)。本研究擬在前期工作基礎(chǔ)上，進一步驗證靶向TDRG1基因mRNA的shRNA重組質(zhì)粒對NTERA-2細胞中TDRG1基因表達的干擾作用，探討TDRG1基因?qū)TERA-2細胞生物學(xué)特性的影響。
方法
2、:1.RT-PCR及細胞免疫熒光(IF)檢測TDRG1基因mRNA及蛋白在NTERA-2細胞和小鼠睪丸畸胎瘤F9細胞中的表達。2.利用已構(gòu)建的TDRG1-shRNA重組質(zhì)粒在體外轉(zhuǎn)染NTERA-2細胞，實時定量PCR(qRT-PCR)及IF檢測轉(zhuǎn)染后NTERA-2細胞TDRG1基因mRNA及蛋白表達的變化。3.采用MTT實驗、Tranwell實驗及流式細胞儀檢測轉(zhuǎn)染后NTERA-2細胞體外增殖、侵襲能力及凋亡潛能的變化。
結(jié)果
3、:TDRG1-shRNA486及TDRG1-shRNA/control重組質(zhì)粒體外成功轉(zhuǎn)染NTERA-2細胞。相對于空白對照組及陰性轉(zhuǎn)染組，TDRG1-shRNA486重組質(zhì)粒體外顯著降低NTERA-2細胞TDRG1基因mRNA及蛋白的表達(P＜0.05)。TDRG1基因mRNA及蛋白表達顯著降低后，實驗組NTERA-2細胞體外增殖、侵襲能力下降，而凋亡潛能增加(P＜0.05)。
結(jié)論:1.前期構(gòu)建的TDRG1-shRNA48
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