重組蛛絲蛋白人工紡絲和組織工程支架材料的研究.pdf

1、蜘蛛絲屬于纖維蛋白，是一種可降解且無(wú)污染的生物材料，它的高強(qiáng)度、高韌性和高彈性的優(yōu)良性質(zhì)受到各國(guó)研究人員的廣泛關(guān)注，在紡織行業(yè)、醫(yī)療衛(wèi)生和軍事領(lǐng)域等方面有潛在的應(yīng)用前景。本研究論文在本室前期工作的基礎(chǔ)上，探討已構(gòu)建的基因重組蛛絲蛋白工程菌pNS2/BL21(DE3)如何提高重組蛋白得率的方法、濕態(tài)紡絲法中各因素對(duì)獲得性能優(yōu)良的重組拖絲蛋白纖維的影響，測(cè)試了該蛋白與其他高分子材料的共混支架的性能，對(duì)蛋白的降解行為和細(xì)胞相容性進(jìn)行了分析和討

2、論，并首次嘗試了電紡法制備重組蛛絲纖維。 人工蛛絲纖維的紡制和組織工程支架材料的開發(fā)的基礎(chǔ)在于大量的重組蛛絲蛋白，首先對(duì)本室已建立的重組蛋白的發(fā)酵和純化方案進(jìn)行了改進(jìn)、完善，以提高蛋白得率。確定了定期重新轉(zhuǎn)化重組質(zhì)粒的必要性以避免質(zhì)粒在保存過(guò)程中的丟失，采用梯度流加法分批補(bǔ)料，在OD<,600>為35～45誘導(dǎo)，添加前體物0.1[％](w/v)，最終可得目的蛋白表達(dá)水平最佳為0.5g/L(培養(yǎng)基)。經(jīng)過(guò)破碎細(xì)菌的超聲正交實(shí)驗(yàn)、調(diào)

3、節(jié)pH、加熱條件的優(yōu)化，純化重組蛋白的得率提高到大約3.5mg/g(濕菌體)。 濕態(tài)紡絲法可得到直徑約50～70um、白色較均勻、有一定力學(xué)性能的重組蛛絲共混纖維，蛋白含量為70[％]左右，經(jīng)乙醇凝固成形、拉伸和水中增塑，最后冷凍干燥和加熱干燥產(chǎn)生。嘗試通過(guò)電紡法來(lái)獲取人工蛛絲纖維，SEM下觀察直徑約300nm。首次制備了重組蛛絲蛋白與殼聚糖、丙烯酸樹脂的共混支架并分析了力學(xué)性能和結(jié)構(gòu)表征，適當(dāng)?shù)谋壤旌先绾?0[％]重組蛋白時(shí)