CLIL對EAP教學的影響——理工科博士生學術寫作課案例研究_18824.pdf

1、軸突損害是多發(fā)性硬化(multiple sclerosis,MS)最早期及進展嚴重的表現(xiàn),是MS永久殘疾的重要病理決定因素[7]。目前研究認為導致此病理的一個重要因素可能來自髓鞘成分的軸突生長抑制作用,其核心部分是軸突生長抑制轉導通路。軸突生長抑制因子Nogo蛋白受體(Nogo receptor,NgR)是軸突生長抑制轉導通路最重要的遞質受體之一,NgR位于細胞膜上,介導神經(jīng)軸突生長抑制的跨膜信號,其胞內通過RhoA-RhoK通路發(fā)揮作

2、用。Fasudil是Rho激酶(Rho kinase,RhoK)特異性的拮抗劑,有促進神經(jīng)軸突損傷修復作用。本研究通過觀察NgR蛋白在MS的實驗模型一實驗性變態(tài)反應性腦脊髓炎(experimental allergic encephalomyelitis,EAE)的表達情況,及嘗試使用Fasudil治療EAE動物模型,了解NgR的表達情況與EAE的發(fā)病發(fā)展的關系和EAE是否能從Fasudil干預治療中獲益,進而了解神經(jīng)軸突生長抑制通路是

3、否參與了EAE的病理過程及其可能機制,初步探討神經(jīng)軸突生長抑制通路對MS病因和病情進展的影響,以及通過促進受損神經(jīng)再生治療MS的新方法。 材料與方法：分空白對照組(A組)、SD大鼠組(B組)、Lewis大鼠組(C組)、豚鼠組(D組)、Fasudil早期干預組(E組)、Fasudil晚期干預組(F組)、發(fā)病后地塞米松干預組(G組)、發(fā)病后Fasudil+地塞米松干預組(H組)等八組實驗動物。均采用相同劑量及相同方法制作的豚鼠腦脊髓

4、白質勻漿制作的誘導乳劑,誘導建立EAE動物模型,A組動物致敏當天僅雙后足墊皮下注射生理鹽水。對E、F、G、H組動物在相應的時間給予相應的藥物干預治療,對致敏動物進行持續(xù)的行為學觀察,發(fā)病后進行臨床癥狀評分及用HE染色、NISSLE染色、砂羅鉻花青染色(髓鞘)染色等方法觀察病理改變,并進行炎癥評分；免疫組化觀察NgR的表達及行NgR陽性細胞數(shù)量計數(shù),最后用Adobe Photoshop CS310.0、ImageJ 1.37v和SPSS1

5、1.0等軟件處理分析結果。 結果： 1、A、B、C、D四組比較:C組發(fā)病最穩(wěn)定(100％),病程短(平均為8天),患病死亡率高(66.7％);B組發(fā)病穩(wěn)定性較差(50％),潛伏期短(平均為11天),病程較長(平均為11天),患病死亡率低(0);D組發(fā)病穩(wěn)定性較好(83.3％),患病死亡率低(0),而病程最長(平均為18天)。B、C、D組與A組(對照組)臨床平均最高得分相比差異有顯著性意義(P<0.01),B組與C組,及C

6、組與D組相比較,臨床平均最高得分有顯著性差異(P<0.05和P<0.01),但B組與D組比較無顯著性差異(P>0.05)。B、C、D三組動物均有相同的病理改變,如大量炎癥細胞浸潤,膠質細胞增生,血管“袖套樣”和脫髓鞘改變等。 2、A、B兩組患病動物NgR陽性細胞表達比較,無論是NgR平均陽性細胞計數(shù)還是平均灰度值均有顯著性差異(P<0.01)。B、C、D三組患病動物NgR陽性細胞比較,無論是NgR平均陽性細胞計數(shù)還是平均灰度值均

7、未見顯著性差異(P>0.05)。C組患病動物無論是皮層還是脊髓,NgR陽性細胞數(shù)分級評分、炎癥細胞數(shù)分級評分、臨床癥狀評分等三者均存在兩兩的正相關關系(P<0.01)。 3、C、E、F、G、H五組對照,E、F、G、H四組患病死亡率較C組明顯下降,E、H兩組患病死亡率均為0,G組為16.7％,F組為33.3％。C、E、F、G、H五組進行單因素方差分析比較,臨床平均最高得分相比有顯著性差異(P<0.05),其中F、G組與C組臨床平均

8、最高得分相比差異無顯著性(P>0.05),E、H組與C組比較則有顯著性意義(P<0.01和P<0.05)。另外,E、F、G、H四組兩兩比較均未見顯著性差異(P>0.05)。 4、從炎癥評分平均值看,無論是皮層還是脊髓,E、F、G、H四組均較C組下降,但通過統(tǒng)計數(shù)據(jù)分析,只有E組與C組皮層及脊髓兩個部位的評分比較有顯著性差異(P<0.05),余下F、G、H三組與C組皮層及脊髓兩個部位的評分比較均未見顯著性差異(P>0.05),另外

9、,E、F、G、H四組皮層及脊髓兩個部位兩兩比較均未見顯著性差異(P>0.05)。 5、單因素方差分析,C、E、F、G、H五組皮層NgR平均陽性細胞計數(shù)未見顯著性差異(P>0.05),但脊髓的NgR平均陽性細胞計數(shù)有顯著性差異(P<0.05);其各組之間均數(shù)多重比較,E、F組間皮層,及E與F、G、H組間脊髓NgR平均陽性細胞計數(shù)有顯著性差異(P<0.05),余組間比較未見顯著性差異(P>0.05)：從NgR平均灰度值觀察,單因素方

10、差分析,C、E、F、G、H五組無論是皮層還是脊髓,NgR平均灰度值均未見顯著性差異(P>0.05);但各組之間均數(shù)多重比較,E、H組間皮層,及E、F組間脊髓NgR平均灰度值有顯著性差異(P<0.05),余組間比較未見顯著性差異(P>0.05)。 結論： 1、不同種屬動物建立的EAE動物模型各自有不同的臨床特點,但其都有EAE典型的病理特征,本課題的開展因應不同研究項目的需要選取不同種屬的動物模型,Lewis大鼠因為EAE

11、的敏感鼠系,發(fā)病穩(wěn)定,用于建立觀察Fasudil干預治療EAE動物模型。 2、作相同種屬動物模型與空白對照組動物比較時,患病SD大鼠皮層和脊髓的NgR表達明顯比對照大鼠高,尤其是在動物的皮層組織。NgR表達主要集中在病理損害區(qū)域的邊緣,往往病損區(qū)越大,NgR表達的指標就越高；致病SD大鼠皮層損害較脊髓嚴重,皮層NgR表達的指標與對照的差異也較脊髓明顯。 3、不同種屬動物模型的比較,皮層和脊髓的NgR表達未見顯著性差異。N

12、gR在EAE動物模型中表達的改變無種屬的特異性,具有普遍意義。 4、根據(jù)EAE動物模型中NgR的表達與臨床癥狀及炎癥評分兩項指標之間的比較,NgR的表達與EAE動物模型的臨床病理表現(xiàn)存在明確的正相關關系。 5、從臨床療效分析,Fasudil對EAE的治療效果肯定,其在早期干預和晚期聯(lián)用地塞米松時,均有較好的療效。 6、Fasudil可能通過兩種途徑治療EAE：(1)Fasudil對抑制EAE的炎癥發(fā)展存在-定效果