α-生育酚對SD大鼠顱腦損傷的治療作用.pdf

1、目的：維生素E是一組分子的總稱，包括α、β、γ、δ生育酚和α、β、γ、δ生育三烯酚。這些分子具有共同的色滿環(huán)結構，但連接不同的類異戊二烯側鏈。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，維生素E具有易被氧化的特性，是一種天然的抗氧自由基物質。尤其是α-生育酚已是一種國際公認的強抗氧自由基物質。α-生育酚可與氧自由基反應，生成α-生育醌，從而奪取氧自由基分子上的不配對電子，使其成為穩(wěn)定的沒有強氧化性的分子。顱腦損傷后，受損腦組織生成大量氧自由基，產生氧自由基的原因

2、主要是: 1．黃嘌呤氧化酶作用于次黃嘌呤，產生大量氧自由基； 2．在顱腦損傷等情況下，由于血管損傷造成的銅等重金屬離子滲入組織中，在維生素C等介導下，產生大量自由基； 3．前列腺素和兒茶酚胺等作用產生大量氧自由基； 4．由于顱腦損傷后引起的腦組織缺血缺氧，使神經組織細胞的線粒體呼吸鏈不能得到足夠氧分子。這樣呼吸鏈中產生的電子就無法正常傳遞，使僅存的氧分子必須接受更多的電子，而成為氧自由基。氧自由基損傷是顱

3、腦損傷后造成繼發(fā)性損傷的重要原因，而α-生育酚可有效減少氧自由基，減少氧自由基造成的損傷。本研究分別對神經元細胞和顱腦損傷的SD大鼠兩個部分闡述α-生育酚對顱腦損傷的治療作用。 第一部分α-生育酚對神經元的保護作用 目的：比較α-生育酚保護神經元與無α-生育酚保護神經元在氧自由基損傷后，神經元細胞內外氧自由基濃度變化、神經元細胞膜穩(wěn)定性、神經元線粒體功能、琥珀酸脫氫酶mRNA和神經元形態(tài)的不同。 方法：培養(yǎng)SD大

4、鼠神經元，并將這些神經元分為兩組：α-生育酚保護神經元組與無α-生育酚保護神經元組。其中α-生育酚保護神經元組神經元培養(yǎng)皿中加入α-生育酚，使α-生育酚達到 80mg/L。用Fenton 反應對兩組神經元進行氧自由基損傷。使用電子自旋共振儀、共聚焦顯微鏡和高壓液相色譜儀對兩組神經元傷后0.5、1、1.5和2小時神經元細胞內外氧自由基濃度、神經元細胞膜穩(wěn)定性、神經元線粒體形態(tài)和功能進行分析；使用rtPCR法觀察兩組神經元琥珀酸脫氫酶mRN

5、A的變化；并使用電子顯微鏡觀察兩組神經元細胞顯微形態(tài)的變化，以確定α-生育酚對神經元的保護作用。 結果：在對傷后0.5、1、1.5和2小時時間點α-生育酚保護神經元與無α-生育酚保護神經元各項數(shù)據(jù)進行比較，發(fā)現(xiàn)1.α-生育酚保護神經元細胞內外氧自由基濃度均低于無α-生育酚保護神經元；2.α-生育酚保護神經元細胞膜穩(wěn)定性、線粒體功能和線粒體關鍵酶活性均強于無α-生育酚保護神經元；3.α-生育酚保護神經元琥珀酸脫氫酶mRNA 量高于

6、無α-生育酚保護神經元：4.α-生育酚保護神經元細胞顯微結構破壞比無α-生育酚保護神經元少。 結論：在本部分研究中通過這4部分實驗證明了α-生育酚可以減少由Fenton反應產生的神經元外的氧自由基和細胞內產生的內源性氧自由基，而且減少氧自由基對神經元細胞膜、線粒體、重要功能酶和mRNA的損傷作用。 第二部分α-生育酚對中型顱腦損傷大鼠腦組織的保護作用 目的：通過監(jiān)測中型顱腦損傷SD大鼠傷后腦組織內氧自由基濃度、顱

7、內壓(ICP)、腦組織中興奮性氨基酸濃度和細胞內鈣離子濃度變化，評價α-生育酚對中型顱腦損傷SD大鼠治療作用。同時評價不同α-生育酚給藥方式的優(yōu)缺點。 方法：本部分研究共對 256只250-300gSD 雄性大鼠進行研究。這些大鼠共分為4組，分別為腦實質透析α-生育酚組(組1)，腦室透析α-生育酚組(組2)、腹腔注射α-生育酚組(組3)和單純損傷組(組4)。采用液壓打擊法分別對4組大鼠造成中型顱腦損傷，傷后采用微透析技術對組 1

8、 損傷區(qū)腦組織灌注α-生育酚：用微透析技術對組2腦室內灌注α-生育酚；對組3腹腔注射α-生育酚：組4不作處理。采用電子自旋共振儀、高壓液相色譜儀等儀器分別對4組大鼠連續(xù)觀測72小時，分別監(jiān)測大鼠腦組織內不同時間點氧自由基濃度、顱內壓(ICP)、腦組織中興奮性氨基酸濃度和細胞內鈣離子濃度變化。并通過 H.E和甲胎盤蘭染色對腦組織切片進行染色，并觀察腦組織形態(tài)變化。 結果：通過對各時間點4組大鼠不同指標的觀測，發(fā)現(xiàn)通過α-生育酚治療

9、的大鼠腦組織中央自由基濃度、顱內壓升高水平、腦組織中興奮性氨基酸濃度和腦組織細胞內鈣離子濃度均低于未經α-生育酚治療的大鼠。對組1、2和3間進行比較，組1在傷后4小時內治療效果要強于其他2組，而傷后4小時以后則為組3治療效果最好。 結論：本部分實驗證明α-生育酚治療可減少中型顱腦損傷大鼠傷后腦組織氧自由基濃度、ICP上升、谷氨酸濃度和神經細胞內鈣離子濃度，并且從病理切片證明了α-生育酚治療效果。同時證明腦組織內和腦室內微透析給藥

10、方式是可行和有效的治療方法。 創(chuàng)新點： 1．對神經元細胞內外氧自由基定量監(jiān)測，從而證明α-生育酚減少神經元細胞內外氧自由基濃度作用。 2．通過共聚焦連續(xù)攝影，發(fā)現(xiàn)氧自由基首先損傷神經元軸突和樹突與神經元的結合部細胞膜，再損傷細胞膜的其他部位。 3．首次證明α-生育酚可減少氧自由基對神經元琥珀酸脫氫酶mRNA損傷。 4．首次采用損傷腦組織內和腦室內微透析方法進行α-生育酚治療，并證明這兩種方法的可行