VEGF、HIF-1α和MMP-9在尖銳濕疣組織中的表達(dá)及其與血管生成的關(guān)系.pdf

1、尖銳濕疣(condyloma acuminatum,CA)是由人類乳頭瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染引起的一種常見(jiàn)的性傳播疾病(sexually transmitted disease,STD),發(fā)病率居性傳播疾病第二位,并逐年升高.HPV是一種嗜上皮細(xì)胞的DNA病毒,廣泛感染皮膚、生殖道、呼吸道、消化道上皮組織,與人類多種良惡性腫瘤密切相關(guān).CA臨床多表現(xiàn)為生殖器部位菜花狀或乳頭狀增生物,雖是一種良性增

2、生性疾病,但具有增生快、傳染性強(qiáng)、易于復(fù)發(fā)的特點(diǎn),部分有轉(zhuǎn)化為惡性腫瘤的可能.不僅嚴(yán)重影響患者身心健康,而且對(duì)社會(huì)和家庭造成極大危害. 新生血管的生成與腫瘤關(guān)系密切已得到眾多研究證實(shí),在實(shí)體腫瘤中,如果沒(méi)有微血管的發(fā)生,腫瘤僅可通過(guò)擴(kuò)散緩慢生長(zhǎng)到1～2mm<'3>,只有在新生血管形成以后,腫瘤才能迅速長(zhǎng)大.CA是HPV病毒感染引起的良性增生物,其發(fā)生發(fā)展可能與血管生成關(guān)系密切,研究血管生成與CA的關(guān)系將具有重要的意義.判斷血管生

3、成的可靠指標(biāo)是測(cè)量微血管密度(microvessel density,MVD),CD34是血管內(nèi)皮細(xì)胞的特異性標(biāo)志物,用以顯示腫瘤間質(zhì)的微血管.血管生成是各種細(xì)胞因子共同作用的結(jié)果.血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)是目前已知的最強(qiáng)有力的血管生成因子,它直接作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞,刺激內(nèi)皮細(xì)胞的分裂和增殖,誘導(dǎo)腫瘤血管生成.缺氧誘導(dǎo)因子-1(haypoxia-inducible

4、factor-1,HIF-1)是腫瘤缺氧狀態(tài)下血管生成的核心調(diào)控因子,通過(guò)影響其他血管生長(zhǎng)因子的表達(dá),而參與血管生成的全過(guò)程.血管形成的另一重要步驟是降解細(xì)胞外基質(zhì),基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloprotemase,MMP)是具有降解細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM)功能的一組鋅依賴性內(nèi)切酶,MMP-9在調(diào)節(jié)ECM的代謝、影響新生血管的形成過(guò)程中作用尤為突出. 目前HIF-1α、MMP-

5、9在腫瘤組織中的作用研究較多,但HIF-1α、MMP-9與CA中MVD的關(guān)系國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)報(bào)道,HIF-1α、MMP-9與VEGF在CA組織中的相互關(guān)系也未見(jiàn)報(bào)道.本研究應(yīng)用免疫組化SP法檢測(cè)35例CA組織和15例正常人包皮組織中VEGF、HIF-1α、MMP-9及CD34的表達(dá),并探討它們?cè)贑A血管生成中的可能作用及相互關(guān)系. 材料與方法 1.材料 CA標(biāo)本35例,取材于鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院皮膚性病科,其中男23

6、例,女12例;年齡19～62歲,平均30.8歲;病程20～140天,平均52.6天.臨床表現(xiàn)典型,病理診斷明確,原位雜交證實(shí)為HPV感染,符合CA臨床實(shí)驗(yàn)室診斷標(biāo)準(zhǔn).另取15例經(jīng)組織病理學(xué)證實(shí)的泌尿外科手術(shù)切除正常成年男性包皮組織作為對(duì)照組. 2.方法 應(yīng)用免疫組化SP法對(duì)CA組織和正常人包皮組織中VEGF、HIF-1α、MMP-9蛋白的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè),抗CD34單克隆抗體標(biāo)記MVD.HIF-1α、MMP-9和VEGF表達(dá)

7、綜合染色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞占總細(xì)胞數(shù)的百分比進(jìn)行半定量處理.染色強(qiáng)度按著色強(qiáng)弱但明顯強(qiáng)于陰性對(duì)照者為1分,染色清晰者為2分,染色強(qiáng)者為3分;陽(yáng)性細(xì)胞占總細(xì)胞數(shù)的10﹪～50﹪者為2分,51﹪～80﹪者為3分,>80﹪者為4分.上述兩相評(píng)分相加,只要陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<10﹪者為(-);弱陽(yáng)性表達(dá)(+):3分;陽(yáng)性表達(dá)(++):4～5分;強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)(+++):6～7分.MVD值取微血管密集的部位,高倍鏡(×200)5個(gè)視野平均值. 3.統(tǒng)計(jì)學(xué)

8、處理將所有數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS11.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理.計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示(x±s),用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料采用X<'2>檢驗(yàn);兩變量間的相關(guān)性采用非參系統(tǒng)中的Spearman等級(jí)相關(guān)進(jìn)行分析.顯著性水準(zhǔn)α=0.05. 結(jié)果 1.CD34在CA組織和正常包皮組織中的表達(dá)CA組與正常對(duì)照組相比真皮微血管明顯增多且有管腔擴(kuò)張.CA組織的MVD值(42.52±5.60)明顯高于正常對(duì)照組(26.36±6.60),二者差異有顯著

9、性(t=-13.361,P<0.01). 2.VEGF在CA組織和正常包皮組織中的表達(dá)35例CA組織均表達(dá)VEGF,陽(yáng)性率100﹪(35/35),表達(dá)強(qiáng)度多在(++～+++),15例J下常包皮對(duì)照組織中均表達(dá)VEGF,陽(yáng)性率100﹪(15/15).VEGF在CA組織除角質(zhì)層外的表皮全層細(xì)胞均有強(qiáng)表達(dá),正常組織中僅有弱的表達(dá),且主要在基底層表達(dá).正常包皮組織表達(dá)強(qiáng)度多在(+～++);CA組織與正常對(duì)照組VEGF陽(yáng)性表達(dá)率差異無(wú)顯著

10、性,但兩組陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x<'2>=17.388,P<0.01). 3.HIF-la在CA組織和正常包皮組織中的表達(dá) 35例CA組織中HIF-la陽(yáng)性表達(dá)33例,占94.3﹪(33/35),表達(dá)強(qiáng)度多在(++～+++),正常對(duì)照組陽(yáng)性表達(dá)率66.7﹪(10/15),表達(dá)強(qiáng)度多在(-～+);CA組織與正常對(duì)照組陽(yáng)性率及陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01). 4.MMP-9在CA組織和正常包皮組

11、織中的表達(dá)35例CA組織均表達(dá)MMP-9,陽(yáng)性率100﹪(35/35),表達(dá)強(qiáng)度多在(++～+++),正常組織中陽(yáng)性率86.7﹪(13/15),表達(dá)強(qiáng)度多在(+～++);CA組織與正常對(duì)照組陽(yáng)性率比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x<'2>=2.009,P>0.05),但兩組陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x<'2>=21.805,p<0.01). 5.CA組織中VEGF、HIF-la及MMP-9表達(dá)與MVD值之間的表達(dá)情況及相關(guān)性分析CA組織中

12、VEGF、HIF-1α、MMP-9的表達(dá)均與MVD值成正相關(guān),且隨著表達(dá)強(qiáng)度的增強(qiáng)MVD值亦隨之增加.(r=0.895,0.748,0.835 P<0.01). 6.CA組織中VEGF表達(dá)與HIF-1α、MMP-9表達(dá)之間的相關(guān)性分析CA組織中VEGF與HIF-1α及MMP-9陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度比較分別呈正相關(guān),(r=0.828,0.748<0.01),HIF-1α與MMP-9表達(dá)強(qiáng)度也具有相關(guān)性,(r=0.664,P<0.01).

13、 結(jié)論 1.VEGF、HIF-1α MMP-9在CA組織中的表達(dá)強(qiáng)度均高于對(duì)照組,提示VEGF、HIF-lα、MMP-9在CA的生長(zhǎng)過(guò)程中具有重要作用.2.VEGF、HIF-1α、MMP-9的表達(dá)強(qiáng)度與MVD均呈正相關(guān),表明在CA組織中VEGF、HIF.1α、MMP-9可能通過(guò)促進(jìn)血管生成,進(jìn)而刺激CA的生長(zhǎng).3.CA組織中VEGF表達(dá)與HIF-1α表達(dá)呈正相關(guān),提示在缺氧狀態(tài)下CA組織中HIF-1α表達(dá)上調(diào)可能通過(guò)激活V