鴉膽子油乳聯(lián)合米托蒽醌對(duì)激素抵抗性前列腺癌的作用及機(jī)制研究.pdf

1、激素抵抗性前列腺癌(Hormonerefractoryprostatecancer,HRPC)的治療是泌尿?qū)W界公認(rèn)的難題，目前，對(duì)鴉膽子油乳與米托蒽醌聯(lián)合應(yīng)用抗HRPC的效果和可能機(jī)制尚未見(jiàn)深入的報(bào)道，本研究試圖從基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)角度加以詮釋?zhuān)瑸閮伤幝?lián)合治療方案的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。實(shí)驗(yàn)共分兩大部分： 第一部分：鴉膽子油乳聯(lián)合米托蒽醌對(duì)HRPC瘤株P(guān)C3的體外藥效研究 目的:通過(guò)對(duì)藥物干預(yù)PC3細(xì)胞生長(zhǎng)的體外作用研究，探討鴉膽

2、子油乳聯(lián)合米托蒽醌抗HRPC的效果及可能機(jī)制。 方法:實(shí)驗(yàn)隨機(jī)分組如下：A組——鴉膽子油乳組，B組——米托蒽醌組，C組——鴉膽子油乳與米托蒽醌合用組，另設(shè)無(wú)藥物干預(yù)的對(duì)照(Control)組。分別運(yùn)用M'TT法、RT-PCR、Westem-Blot及流式細(xì)胞周期分析(FCM)等技術(shù)，觀察比較各組的PC3細(xì)胞增殖、凋亡及相關(guān)基因表達(dá)變化。 結(jié)果:MTT檢測(cè)表明，鴉膽子油乳與米托蒽醌對(duì)PC3細(xì)胞增殖的抑制作用呈濃度依賴(lài)性和時(shí)

3、間依賴(lài)性，鴉膽子油乳500μg/ml與低濃度劑量米托蒽醌(2.5μg/ml)聯(lián)合作用24h、48h、72h后的抑制率分別為45.6％、69.9％、87.3％，均高于單獨(dú)用藥組，兩藥合用有相加效應(yīng)。500μg/ml鴉膽子油乳、2.5μg/ml米托蒽醌單獨(dú)及聯(lián)合作用48h后：(1)RT-PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，PC3細(xì)胞中有Bcl-2、Bax、MMP9(基質(zhì)金屬蛋白酶9)、MRP(多藥耐藥蛋白)、PSA基因表達(dá)。與對(duì)照組、A組及B組相比，C組的Bc

4、l-2、MMP9、MRP、PSA的mRNA表達(dá)水平明顯降低，Bax的mRNA表達(dá)水平明顯升高，差異顯著(P＜0.05)；(2)WesternBlot檢測(cè)表明，與對(duì)照組、A組及B組相比，C組中Bcl-2蛋白表達(dá)水平明顯降低，Bax蛋白表達(dá)水平明顯升高，差異顯著(P＜0.05)；(3)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組、A組及B組相比，C組的G0/G1期細(xì)胞比例高達(dá)70.6％，差異顯著(P＜0.05)，C組的S期和G2/M期細(xì)胞比例均較低，分別為

5、13.6％和15.8％。 結(jié)論:1.鴉膽子油乳與米托蒽醌對(duì)PC3細(xì)胞的生長(zhǎng)均有一定的抑制作用，兩藥聯(lián)合應(yīng)用的抑瘤效果優(yōu)于單獨(dú)用藥組。 2.鴉膽子油乳與低劑量米托蒽醌聯(lián)合應(yīng)用，能顯著下調(diào)抑凋亡基因Bcl-2在PC3細(xì)胞中的表達(dá)，上調(diào)促凋亡基因Bax的表達(dá)，誘導(dǎo)HRPC瘤細(xì)胞凋亡。 3.鴉膽子油乳與低劑量米托蒽醌聯(lián)合應(yīng)用，能顯著下調(diào)侵襲性相關(guān)基因MMP-9和耐藥相關(guān)基因MRP在PC3細(xì)胞中的表達(dá)，一定程度上可降低HR

6、PC腫瘤的侵襲力和耐藥性。 4.鴉膽子油乳與低劑量米托蒽醌合用，能明顯升高PC3細(xì)胞G0/G1期，降低S期比例，抑制腫瘤細(xì)胞DNA合成，阻斷其增殖進(jìn)程。 第二部分：鴉膽子油乳聯(lián)合米托蒽醌對(duì)HRPC移植瘤的抑制作用研究 目的:通過(guò)對(duì)HRPC移植瘤的體內(nèi)藥物作用研究，進(jìn)一步判斷鴉膽子油乳聯(lián)合米托蒽醌對(duì)HRPC的療效，為后續(xù)臨床治療提供科學(xué)理論依據(jù)。 方法:取24只雄性裸鼠，在其背部皮下接種PC3細(xì)胞，腫瘤模型

7、建成后開(kāi)始藥物干預(yù)(給藥共持續(xù)3周)。實(shí)驗(yàn)隨機(jī)分組及給藥劑量如下：①Control組(無(wú)藥物干預(yù)的對(duì)照組)，②A組(鴉膽子油乳，200mg/kg/d)，③B組(低劑量米托蒽醌，1mg/kg/d)，④C組(鴉膽子油乳200mg/kg/d+米托蒽醌1mg/kg/d)，每組6只。觀察比較這4組瘤結(jié)節(jié)重量、體積、腫瘤及肝腎組織病理變化。 結(jié)果:實(shí)驗(yàn)結(jié)束后處死荷瘤裸鼠，觀察結(jié)果如下：1.對(duì)照組和A、B、C三個(gè)藥物干預(yù)組的平均瘤重分別為43

8、6.1mg、184.3mg、197.2mg、103.9mg，C組的抑瘤率為76.2％，明顯高于A組和B組(P＜0.05)。 2.對(duì)照組和A、B、C三個(gè)藥物干預(yù)組的腫瘤平均體積分別為359.2mm3、158.6mm3、175.7mm3、93.8mm3，C組的腫瘤體積明顯小于A組、B組和對(duì)照組(P＜0.05)。 3.光鏡下觀察，對(duì)照組和A、B、C三個(gè)藥物干預(yù)組的肝腎組織均無(wú)明顯異常，C組的腫瘤細(xì)胞壞死征明顯。 結(jié)論: