骨骼肌兩型肌纖維體外培養(yǎng)條件的初探.pdf

1、目的:通過分別對體外培養(yǎng)條件下的骨骼肌兩型肌纖維細胞的標志蛋白MHC基因同功型的檢測,以探索適合骨骼肌兩型肌纖維細胞的培養(yǎng)條件,為進一步研究兩型肌纖維細胞的區(qū)別及轉化機制奠定基礎。
　　方法:實驗以18只家兔作為研究對象,不拘雌雄,4-6周,體重500-1000g,每項指標檢測各用3只。動物分四組:Ⅰ型和Ⅱ型骨骼肌組織組,Ⅰ型和Ⅱ型骨骼肌消化細胞組,Ⅰ型和Ⅱ型骨骼肌細胞常氧(1、3、7天)型和Ⅰ型和Ⅱ型骨骼肌細胞低氧(3％O2)培

2、養(yǎng)組。取家兔后肢右側半膜肌的固有半膜肌亞部和副半膜肌背側亞部,采用胰蛋白酶一步消化法,用含15%胎牛血清的高糖 DMEM作為細胞培養(yǎng)液進行常氧和低氧培養(yǎng),兩型肌纖維培養(yǎng)細胞分別在培養(yǎng)1天、3天、7天取材進行觀察。最后用常氧及低氧培養(yǎng)3天的兩型骨骼肌細胞做反轉錄聚合酶鏈式反應(Rt-PCR)鑒定和灰度值測定作對照,以分析骨骼肌兩型肌纖維細胞mRNA標志蛋白MHC的表達變化。
　　結果:1.骨骼肌組織檢測結果:固有半膜肌表達 MHCⅠ

3、及少量的 MHCⅡ型,副半膜肌表達MHCⅡa, MHCⅡb型。
　　2.消化后未經培養(yǎng)的細胞檢測結果:固有半膜肌細胞表達 MHCⅠ型、MHCⅡa和MHCⅡb型,副半膜肌表達MHCⅡa、 MHCⅡb型。
　　3.培養(yǎng)細胞檢測結果:在常氧培養(yǎng)組固有半膜肌表達 MHCⅡa、 MHCⅡb,不表達MHCⅠ型;副半膜肌表達 MHCⅡa, MHCⅡb型,不表達 MHCⅠ型。在低氧培養(yǎng)組兩型骨骼肌細胞均表達為MHCⅡa, MHCⅡb,不表達

4、MHCⅠ型。
　　4.我們選取骨骼肌組織組、培養(yǎng)后第3天的常氧培養(yǎng)組和低氧培養(yǎng)組進行單因素方差分析統(tǒng)計,結果顯示:Ⅰ型肌纖維細胞在常氧及低氧條件的 MHCⅠ型基因表達與組織相比較存在明顯差異(P<0.05),而 MHCⅡa、MHCⅡb和 MHCⅡx型基因表達無明顯差異(P>0.05)。低氧組與常氧組相比, MHCⅠ、MHCⅡa較高,而 MHCⅡb較低。Ⅱ型肌纖維細胞在常氧及低氧條件的基因MHCⅠ、MHCⅡa、MHCⅡb和MHCⅡx