纖溶酶對后發(fā)性白內(nèi)障抑制作用的實驗研究.pdf

1、目的：隨著顯微手術技術及設備的不斷完善，現(xiàn)代白內(nèi)障囊外摘除術的許多并發(fā)癥已經(jīng)明顯減少，后發(fā)性白內(nèi)障(AC)又稱后囊膜混濁(PCO)已經(jīng)成為這一手術最常見和最嚴重的并發(fā)癥，嚴重影響白內(nèi)障患者術后遠期視力的恢復。因此，如何有效的預防PCO的形成已經(jīng)成為迫切需要眼科學者解決的問題。迄今為止，其發(fā)病機制尚未完全闡明。近年來的研究表明，堿性成纖維生長因子（bFGF）和纖維蛋白是參與PCO的形成的主要因子。纖溶酶通過對纖維蛋白的特異性降解從而誘導玻

2、璃體后脫離，但是，其在PCO中的研究尚未見報道。本實驗通過對新西蘭大白兔行白內(nèi)障囊外摘除術制造PCO動物模型。應用裂隙燈觀察前房炎癥反應、PCO的形成過程；應用光鏡觀察后囊膜上的晶狀體上皮細胞(LECs)的形態(tài)以及纖溶酶對角膜、視網(wǎng)膜的影響；應用免疫組化半定量檢測增殖細胞核抗原(PCNA)在后囊膜上LECs的表達情況；應用ELISA技術檢測術后房水中bFGF的含量。為探討纖溶酶對PCO形成的抑制作用的機制以及其在臨床應用提供理論依據(jù)和實

3、驗依據(jù)。
　　 方法：清潔級健康4月齡新西蘭大白兔20只，體重2.5-3.0kg，無眼部疾病。隨機分成兩組，即對照組和實驗組。兩組均在全身麻醉下行白內(nèi)障囊外摘除術，術后對照組不給予任何處理，實驗組給予5IU/ml纖溶酶0.2ml前房注射。術后給予妥布霉素/地塞米松眼水點眼6/日，一周后改為4/日，點三周停藥。術后1天、3天、1周、2周、2個月進行眼部裂隙燈檢查，觀察并記錄PCO的發(fā)生時間、程度、部位、形態(tài)及前房炎癥反應和眼壓，并

4、抽取房水0.2ml采用ELISA技術以檢測前房內(nèi)bFGF的含量，2個月后空氣栓塞處死并摘除眼球，將其固定于4％多聚甲醛溶液1周，石蠟包埋制成組織切片，HE染色，光鏡下觀察后囊膜上的LECs的形態(tài)以及纖溶酶對角膜、視網(wǎng)膜的影響；光鏡下觀察經(jīng)免疫組化染色后增殖細胞核抗原(PCNA)在后囊膜上LECs的表達情況。所得實驗數(shù)據(jù)采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件分析。
　　 結果：
　　 1、前房炎癥：白內(nèi)障術后第1天兩組所有術眼出現(xiàn)不

5、同程度的前房炎癥反應；術后第3天實驗組有14眼仍存在前房炎癥反應，對照組有19眼，實驗組發(fā)生率較對照組低；術后1周所有術眼前房炎癥反應消失，對照組仍有6眼存在前房炎癥反應；術后2周對照組所有術眼前房炎癥反應消失。兩組前房炎癥反應消退時間：實驗組為5.80±1.88天；對照組為8.90±3.53天，統(tǒng)計學上有顯著性差異。
　　 2、術前、后眼內(nèi)壓的變化分析：實驗組與對照眼術后不同時間點眼壓值之間無顯著性差異，而手術前后不同時間點有

6、差異，術前平均眼壓值為23.46±2.46mmHg，與術后第1、3天的平均眼壓值32.13±3.55mmHg、26.67±2.79mmHg相比較，統(tǒng)計學上有顯著性差異，而與術后第1、2、4周平均眼壓值24.98±2.80mmHg、23.39±2.82mmHg、22.63±2.75mmHg相比較，無顯著性差異。
　　 3、PCO的裂隙燈照相：實驗組在術后2周開始出現(xiàn)PCO;對照組術后1周開始出現(xiàn)PCO。術后2個月時PCO發(fā)生率：實

7、驗組：Ⅰ級5眼，Ⅱ級4眼，11眼未出現(xiàn)PCO;對照組：Ⅰ級7眼，Ⅱ級5眼，Ⅲ級6眼，2眼未出現(xiàn)PCO。PCO的發(fā)生率：實驗組為45％，對照組為90％，統(tǒng)計學上有顯著性差異，在PCO發(fā)生的時間上：實驗組平均為＞2月；對照組平均為1月，統(tǒng)計學上有顯著性差異;PCO的混濁程度評分：實驗組為0.65±0.81、對照組為：1.75±1.02，統(tǒng)計學上有顯著性差異。
　　 4、組織病理組織學：①后囊膜H染色：實驗組中央?yún)^(qū)后囊膜上LECs稀少

8、，呈單層排列。對照組中央?yún)^(qū)和赤道部后囊膜上均可見多層增生的LECs以及大量的膠原纖維附著；角膜HE染色：兩組角膜各層結構基本完整，可見散在內(nèi)皮細胞脫落；視網(wǎng)膜HE染色：兩組視網(wǎng)膜各層結構完整，神經(jīng)節(jié)細胞大小一致，輪廓規(guī)則，細胞邊界清晰。②免疫組化染色：細胞核染色為棕黃色黃褐色為陽性結果。實驗組后囊膜可見單層著色，對照組后囊膜可見多層細胞染色。實驗組IOD值平均為31.7±3.8，對照組IOD值平均為61.3±4.0，統(tǒng)計學上有顯著性差異

9、。
　　 5、ELISA法測定前房房水中bFGF的含量：術后第1天、3天、7天、2周和1月，實驗組前房內(nèi)的含量為0.78±0.19ng/ml、0.38±0.12ng/ml、0.68±0.21ng/ml、0.81±0.31ng/ml、0.93±0.21ng/ml，對照組前房內(nèi)bFGF的含量為15.88±1.38ng/ml、14.34±1.21ng/ml、9.13±1.25ng/ml、4.87±0.76ng/ml、2.75±1.01