慢性氟中毒患者及大鼠血液與肝組織DNA修復(fù)基因甲基化改變的研究.pdf

1、目的: 通過(guò)研究地氟病患者以及氟中毒大鼠模型 DNA修復(fù)基因O6-甲基鳥嘌呤-DNA-甲基轉(zhuǎn)移酶基因（MGMT）、錯(cuò)配修復(fù)基因（MLH1）啟動(dòng)子區(qū)甲基化水平檢測(cè)其mRNA及蛋白水平改變，探討DNA修復(fù)基因甲基化、基因表達(dá)與地方性氟中毒發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。
　　方法: 1.在貴州省畢節(jié)市典型燃煤型地氟病區(qū)進(jìn)行抽樣，選取八寨鎮(zhèn)毛栗坪村45名村民為氟病組，根據(jù)患者氟斑牙和氟骨癥的分度分組，依次分為輕度組、中度組和重度組，在非氟病區(qū)貴陽(yáng)市沙文

2、鎮(zhèn)新寨村，選取年齡性別平衡均匹配的健康人群做為正常對(duì)照。酚氯仿法抽提全血 DNA，甲基化特異性 PCR（MSP）法檢測(cè)DNA中 MGMT、MLH1基因甲基化水平。提取受檢者血液 RNA，實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)MGMT、MLH1基因mRNA表達(dá)水平變化。2.復(fù)制慢性氟中毒大鼠模型，20只/組，分為對(duì)照組和染氟組，對(duì)照組常規(guī)飼養(yǎng)，染氟組大鼠的飲用水中加入氟化鈉50mg/L，飼養(yǎng)6個(gè)月之后采取股動(dòng)脈放血方式處死。取其動(dòng)脈血及肝組織，酚氯仿法

3、抽提基因組DNA，MSP法檢測(cè)血液樣本及肝組織中MGMT、MLH1基因甲基化水平。提取總RNA，實(shí)時(shí)熒光定量 PCR法檢測(cè)各組 MGMT、MLH1基因 mRNA表達(dá)水平；裂解法提取肝組織蛋白，采用Western blot檢測(cè)各組MGMT、 MLH1蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果: （1）氟病區(qū)患者血液樣本 MGMT、MLH1基因明顯出現(xiàn)甲基化，且甲基化陽(yáng)性率隨氟中毒程度加深而升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；（2）氟病區(qū)患者血液樣

4、本 MGMT、MLH1基因 mRNA表達(dá)水平較對(duì)照組相比降低，且表達(dá)水平與氟中毒程度成負(fù)相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；（3）染氟組大鼠血液 MGMT、MLH1基因的甲基化陽(yáng)性率與對(duì)照組比升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。（4）染氟組大鼠血液 MGMT、MLH1基因的mRNA表達(dá)水平低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。（5）染氟組大鼠肝組織 MGMT、MLH1基因甲基化陽(yáng)性率與對(duì)照組相比明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

5、（P<0.05）。（6）染氟組大鼠肝組織 MGMT、MLH1基因mRNA表達(dá)水平較對(duì)照組降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。（7）染氟組大鼠肝組織 MGMT、MLH1蛋白表達(dá)水平較對(duì)照組降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　結(jié)論: 氟病區(qū)患者血液樣本MGMT、MLH1基因甲基化程度與地氟病嚴(yán)重程度有相關(guān)性，且隨著氟中毒的加深而mRNA表達(dá)水平降低。染氟大鼠血液樣本的MGMT、MLH1基因甲基化陽(yáng)性率與對(duì)照組相比明顯增高