HDL-,2-和HDL-,3-對THP-1巨噬細(xì)胞脂質(zhì)蓄積及相關(guān)蛋白表達的影響.pdf

1、目的研究HDL<,2>和HDL<,3>對THP-1巨噬細(xì)胞膽固醇蓄積及相關(guān)蛋白CD36、SR-BI和PPAR γ表達的影響方法取新鮮抗凝血漿,用超速離心法進行密度梯度離心,收集LDL、HDL<,2>、HDL<,3>.將LDL置于含10μmol/LCuSO4的PBS溶液(pH7.2)中,37℃溫育24h.氧化修飾后的LDL置含200μmol/l EDTA的PBS中透析24h.本實驗分為兩部分,前一部分以研究HDL<,2>和HDL<,3>能

2、否限制THP-1巨噬細(xì)胞膽固醇的蓄積,及其對相關(guān)蛋白的影響為目的.HDL<,2>、HDL<,3>與OxLDL共育,或分別單獨應(yīng)用孵育細(xì)胞.第二部分主要觀測HDL<,2>和HDL<,3>對THP-1巨噬細(xì)胞內(nèi)異常蓄積的脂質(zhì)有何影響,同時檢測相關(guān)蛋白的變化.HDL<,2>、HDL<,3>處理經(jīng)OxLDL誘導(dǎo)過的細(xì)胞.用油紅0染色及高效液相色譜分析法觀測細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)蓄積程度;用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測CD36、SR-BI和PPAR γ mRNA的

3、表達;用Western Blotting檢測CCD36、SR-BI和PPAR γ的蛋白表達.結(jié)論1.HDL<,2>和HDL<,3>可以減少THP-1巨噬細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)蓄積,HDL<,3>的作用強于HDL<,2> 2.HDL<,2>和HDL<,3>可以抑制CD36的表達,HDL<,3>對CD36的抑制作用強于HDL<,2>.3.HDL<,2>和HDL<,3>可以促進OxLDL誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞內(nèi)膽固醇蓄積降低,HDL<,3>的作用強于HDL<,2