P27kip1及相關(guān)分子Jab1在大鼠脊髓損傷中的表達(dá)及意義.pdf

1、目的:脊髓損傷后反應(yīng)性膠質(zhì)細(xì)胞增生及膠質(zhì)瘢痕的形成是神經(jīng)元再生的主要障礙之一，膠質(zhì)細(xì)胞增生及膠質(zhì)瘢痕的形成受到多種生長因子及細(xì)胞因子的調(diào)控，細(xì)胞周期相關(guān)分子P27kip1被證實與脊髓損傷后膠質(zhì)細(xì)胞增生相關(guān)。本研究通過觀察大鼠脊髓損傷后P27kip1及相關(guān)分子Jab1表達(dá)濃度的變化及細(xì)胞定位情況，進(jìn)一步探討它們在脊髓損傷及損傷后膠質(zhì)瘢痕生成過程中的作用，為脊髓損傷的功能性修復(fù)提供新的思路。
　　方法:本實驗共取56只SD大鼠，隨機(jī)分

2、為假手術(shù)對照組與脊髓損傷組，其中脊髓損傷組按損傷后時間分為6h、12h、1d、3d、5d、7d、14d7組，具體分組詳見實驗方法。脊髓損傷組按照改良Allen's法制作SD大鼠脊髓損傷模型，損傷節(jié)段定為T9椎體相應(yīng)脊髓。利用免疫組化技術(shù)觀察P27kip1及Jab1在脊髓損傷后陽性細(xì)胞表達(dá)部位及陽性細(xì)胞數(shù)量的變化，確定其在白質(zhì)及灰質(zhì)中的表達(dá)情況，半定量地明確其表達(dá)濃度的變化及陽性細(xì)胞的組織定位情況;通過免疫熒光雙標(biāo)技術(shù)測定Jab1與神經(jīng)元

3、細(xì)胞標(biāo)記蛋白NeuN及神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記蛋白GFAP的共表達(dá)情況，明確其表達(dá)變化與神經(jīng)元及神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的關(guān)系;通過Westernblot技術(shù)測定P27kip1及Jab1表達(dá)濃度的變化，定量地分析其表達(dá)濃度隨損傷時間的變化;最后通過綜合分析，進(jìn)一步探討P27kip1及Jab1的表達(dá)變化與脊髓損傷后膠質(zhì)細(xì)胞增生及膠質(zhì)瘢痕形成的關(guān)系，以及它們與脊髓損傷后神經(jīng)元的再生及功能恢復(fù)的聯(lián)系。
　　結(jié)果:(1) Jab1免疫組化結(jié)果顯示在脊髓損傷后

4、5天，Jab1陽性細(xì)胞較假手術(shù)組明顯增多，且有統(tǒng)計學(xué)意義，高倍鏡下Jab1陽性細(xì)胞主要為脊髓白質(zhì)中的星形膠質(zhì)細(xì)胞，灰質(zhì)中亦存在Jab1陽性細(xì)胞。(2) P27kip1免疫組化結(jié)果顯示脊髓損傷后5天，P27kip1陽性細(xì)胞數(shù)量較假手術(shù)組減少。(3)免疫熒光雙標(biāo)的結(jié)果顯示:大鼠脊髓損傷后5天的Jab1陽性細(xì)胞較假手術(shù)組明顯增多，且與GFAP標(biāo)記的星形膠質(zhì)細(xì)胞有明顯的共定位表達(dá)，Jab1與NeuN標(biāo)記的神經(jīng)元細(xì)胞也有共定位表達(dá)，與假手術(shù)組相比

5、較均有統(tǒng)計學(xué)意義，但Jab1與GFAP標(biāo)記的星形膠質(zhì)細(xì)胞共定位陽性細(xì)胞增加幅度更大。(4) Western Blot結(jié)果顯示P27kip1在脊髓損傷后即有減少的趨勢，而Jab1則與之呈負(fù)相關(guān)，在損傷后開始增加，在損傷后第5天兩種蛋白濃度均達(dá)最低峰與最高峰，然后開始恢復(fù)，于損傷后14天左右恢復(fù)至假手術(shù)組水平。
　　結(jié)論:在大鼠脊髓損傷中，Jab1表達(dá)的增加與P27kip1的降解明顯相關(guān)，而且這種表達(dá)變化主要存在于增生的星形膠質(zhì)細(xì)胞中