檢測(cè)SMD殘留的免疫傳感器的研制.pdf

1、磺胺類藥物是獸醫(yī)臨床上使用最廣的一類化學(xué)合成抗菌藥，主要用于細(xì)菌感染性疾病和某些原蟲病的預(yù)防和治療。但使用不合理很容易造成組織中的殘留和蓄積。許多國家和組織規(guī)定了其最高殘留限量(MRLS)為0.1μg/g，甚至不得檢出。高效液相色譜、氣．質(zhì)聯(lián)用等是磺胺類藥物殘留檢測(cè)的法定方法，但成本較高，方法繁瑣，不適于大量樣本的測(cè)定。 本課題旨在研制用于檢測(cè)磺胺類藥物SMD的免疫傳感器，主要工作包括：葡萄糖氧化酶標(biāo)記SMD的反應(yīng)、標(biāo)記前后葡萄

2、糖氧化酶(GOD)活力的檢測(cè)、GOD-SMD與抗BSA-SMD的單克隆抗體的特異結(jié)合與檢測(cè)、GOD-SMD與抗BSA-SMD的單克隆抗體特異結(jié)合后的活性測(cè)定、單克隆抗體在尼龍膜上的固定、信號(hào)傳感器的裝配等。 葡萄糖氧化酶標(biāo)記SMD反應(yīng)：本研究采用EDC為催化劑，合成GOD-SMD，通過質(zhì)譜檢測(cè)，標(biāo)記后的葡萄糖氧化酶的分子量明顯增加，可以確定SMD與GOD偶聯(lián)成功；通過分子量計(jì)算可知，平均每個(gè)葡萄糖氧化酶上連接6個(gè)SMD。并且通過

3、傅立葉變換紅外吸收光譜、紫外吸收光譜和圓二色光譜檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)GOD-SMD與GOD在空間結(jié)構(gòu)上有所差異。 標(biāo)記后葡萄糖氧化酶(GOD-SMD)活力的測(cè)定：用改良Amano法測(cè)定了偶聯(lián)在SMD上的GOD活性，發(fā)現(xiàn)其活性很高。 GOD-SMD與抗BSA-SMD的單克隆抗體的特異結(jié)合與檢測(cè)，由于合成單克隆抗體時(shí)所用的的抗原載體蛋白質(zhì)是牛血清白蛋白，只有半抗原與GOD-SMD相同。有報(bào)道認(rèn)為，載體蛋白的不同會(huì)影響到抗原抗體的特異性

4、結(jié)合。本實(shí)驗(yàn)通過CD，Uv光譜掃描方法證實(shí)了GOD-SMD與抗BSA-SMD單克隆抗體的特異性結(jié)合，即兩者發(fā)生了免疫反應(yīng)。GOD-SMD與抗BSA-SMD的單克隆抗體能夠發(fā)生反應(yīng)。 GOD-SMD與抗BSA-SMD的單克隆抗體特異結(jié)合后的活性測(cè)定：用改良的Amailo法測(cè)定了與抗BSA-SMD單克隆抗體特異結(jié)合后的GOD-SMD活性，實(shí)驗(yàn)證明其活性良好。 信號(hào)轉(zhuǎn)換器的裝配：驗(yàn)證了能夠使用離子分析儀(電極)把GOD-SMD