天皰瘡抗體滴度與疾病活動性及CD19、CD20的相關(guān)性研究.pdf

1、背景:
　　 天皰瘡是一組以天皰瘡抗體介導(dǎo)的器官特異性自身免疫性疾病,發(fā)病率雖然很低,但呈上升趨勢。好發(fā)于30-50歲中年人群,無明顯性別差異。臨床上主要分為四型:尋常型、增殖型、落葉型、紅斑型,但四型之間可相互轉(zhuǎn)化。此外,還有皰疹樣天皰瘡、IgA天皰瘡、藥物誘發(fā)的天皰瘡、副腫瘤性天皰瘡、流行性性天皰瘡(又名巴西天皰瘡)等亞型。該組疾病的共同特征有:臨床表現(xiàn)為皰壁薄、松弛易破的水皰或大皰形成；組織病理為棘層松解所致表皮內(nèi)水皰形成

2、；直接免疫熒光檢查(indirect immunofluorescence,IIF)可見棘層細胞間IgG和C3沉積,取患者血清做間接免疫熒光檢查,可顯示血清中有抗表皮棘細胞間物質(zhì)抗體。
　　 天皰瘡的發(fā)病機理尚未完全清楚。越來越多研究認為在天皰瘡發(fā)病過程中,T細胞和B細胞相互作用、相互影響,產(chǎn)生針對自身細胞間物質(zhì)的抗體,從而導(dǎo)致疾病的發(fā)生。天皰瘡的抗原主要集中在橋粒,橋粒是角質(zhì)形成細胞間連接的主要結(jié)構(gòu),由相鄰細胞的細胞膜發(fā)生卵圓

3、形致密增厚而共同構(gòu)成。由兩類蛋白質(zhì)構(gòu)成:一類是跨膜蛋白,位于橋粒芯(desmosomal core),主要由橋粒芯蛋白(desmoglein,Dsg)和橋粒芯膠蛋白(desmocollin,Dsc)構(gòu)成,它們形成橋粒的電子透明細胞間隙和細胞間接觸層；另一類為胞質(zhì)內(nèi)的橋粒斑(desmosomal plaque)蛋白,是盤狀附著板的組成部分,主要成分為橋粒斑蛋白(desmoplakin,DP)和橋粒斑珠蛋白(plakogloubin,PG)

4、。天皰瘡抗體(Pemphigusantibody)與抗原結(jié)合后,通過細胞信號傳導(dǎo)途徑激活一系列蛋白水解酶,導(dǎo)致細胞間鏈接結(jié)構(gòu)水解,從而引起表皮棘層細胞相互分離、棘層松解及表皮內(nèi)水皰形成。鈣粘素是Ca2+依賴的細胞間連接分子,它對表皮細胞間粘附連接起重要作用。天皰瘡抗原的c DNA序列與鈣粘素有明顯的同源性,因此天皰瘡抗體也損害了表皮細胞間的粘連功能,導(dǎo)致棘層松解。棘層松解在PF患者較表淺,損害僅達表皮顆粒層。而在PV患者則深達表皮生發(fā)層

5、。幾乎所有天皰瘡患者免疫病理均示角質(zhì)形成細胞間IgG和C3呈網(wǎng)狀沉積。
　　 天皰瘡的診斷主要結(jié)合四個方面因素考慮:1、典型的臨床皮損表現(xiàn)；2、皮膚組織病理所示的棘層松解；3、免疫病理示角質(zhì)形成細胞間IgG和C3呈網(wǎng)狀沉積；4、組織上發(fā)現(xiàn)患者血清中或原位皮膚存在自身抗橋粒芯糖蛋白抗體。目前天皰瘡治療方法很多,但皮質(zhì)類固醇激素仍是目前的首選,開始劑量需較大,以期在1-2周內(nèi)抑制新的水皰形成,必要時可應(yīng)用皮質(zhì)類固醇激素沖擊療法或加用

6、免疫抑制劑治療。根據(jù)患者皮損面積分為輕、中、重度并給與適合劑量的激素,以不出現(xiàn)新的水皰為宜。皮損面積<體表面積10％為輕度,激素量為30mg/d；體表面積30％<皮損面積<體表面積50％為中度,激素量為60-80 mg/d；皮損面積>體表面積50％為重度,激素量>80 mg/d。此外,部分皮損面積很局限的天皰瘡患者在口服少量激素的同時加用激素軟膏或他克莫司軟膏外用可促進皮損的愈合。
　　 但目前天皰瘡診治中最大的問題是明確診斷和

7、判斷疾病的活動程度及預(yù)后。尼氏征對于天皰瘡的診斷具有較高的特異性,但其敏感性較差。直接免疫熒光(direct immunofluorescence,DIF)檢查是診斷天皰瘡的金標(biāo)準(zhǔn),但反復(fù)的皮膚活檢術(shù)給病人造成較大的痛苦,難以為廣大的患者所接受,也難以作為隨訪的標(biāo)準(zhǔn)。根據(jù)已知的天皰瘡發(fā)病機制,本實驗嘗試檢測血循環(huán)中的天皰瘡抗體對天皰瘡患者進行診斷,并探討其與疾病的活動性的關(guān)系,以尋找出適合臨床診斷、判斷療效和隨訪的指標(biāo)。
　　

8、目的:
　　 1、通過酶聯(lián)免疫吸附(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)檢測天皰瘡患者血清中的抗體IgG滴度,了解其敏感性和特異性。
　　 2、對天皰瘡患者的病情活動度進行評分,探討其與天皰瘡抗體滴度的相關(guān)性。
　　 3、通過流式細胞儀(Flow cytometry,FCM)檢測天皰瘡患者血清中CD19、CD20的表達水平,探討天皰瘡抗體滴度與CD19、CD20表達水平

9、的相關(guān)性。
　　 方法:
　　 l、收集2009-1至2010-2之間門診及住院并確診的38例天皰瘡患者及非天皰瘡患者22人的血清,離心后用天皰瘡抗體檢測試劑盒(MBL公司),通過ELISA法檢測60份血清中天皰瘡抗體IgG的滴度。了解該方法與臨床的相符性,并探討其敏感性和特異性。
　　 2、對確診的天皰瘡患者進行病情活動度評分,分析疾病病情活動評分與天皰瘡抗體滴度進行相關(guān)性。
　　 3、將38例天皰瘡患

10、者中的28位患者的血清經(jīng)流式細胞技術(shù)檢測其中CD19、CD20的表達水平,并與之前檢測的相應(yīng)的天皰瘡抗體滴度進行多元相關(guān)性分析。
　　 結(jié)果:
　　 1、診斷的符合度、敏感性和特異性:38例天皰瘡患者中有37例陽性,1例陰性。22例非天皰瘡患者則均為陰性。該方法的診斷符合率為98.3％,敏感性為97.4％,特異性為100％。
　　 2、病情活動度評分與天皰瘡抗體滴度的Pearson雙變量相關(guān)性分析:病情活動度評分

11、與天皰瘡抗體滴度之間的相關(guān)性具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.001),相關(guān)系數(shù)r=0.671,直線回歸方程為:病情活動評分=1.079+0.671×抗體滴度。
　　 3、天皰瘡抗體滴度與血清CD19、CD20表達水平的多元回歸分析:天皰瘡抗體滴度與血清CD19、CD20表達水平的的相關(guān)性亦具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),將數(shù)據(jù)進行對數(shù)轉(zhuǎn)換后,其復(fù)相關(guān)系數(shù)R=0.55,R2=0.302,IgCD19(x1)的偏回歸系數(shù)為0.518,IgC

12、D20(x2)的偏回歸系數(shù)為0.066,截距為1.674,得出回歸方程為:Lg抗體滴度=1.674+0.518×LgCD19+0.066×LgCD20。
　　 結(jié)論:
　　 1、該實驗進一步證實了天皰瘡抗體用于天皰瘡的診斷具有較高的敏感性及特異性,與臨床符合率較高,對疾病的診斷具有重要的意義。
　　 2、天皰瘡抗體抗體滴度越高,疾病的活動性越強,與疾病活動度相平行,具有較高的相關(guān)性?？捎糜诩膊』顒佣鹊呐袛唷⒅委熜?/p>