鱖消化系統(tǒng)器官發(fā)生的組織學(xué)及胃蛋白酶原基因的克隆.pdf

1、利用形態(tài)學(xué)觀察和連續(xù)組織切片技術(shù)，對(duì)出膜后0～35d的鱖(Siniperca chuatsi)仔稚魚消化系統(tǒng)胚后發(fā)育的組織學(xué)特征進(jìn)行了系統(tǒng)研究。結(jié)果表明，試驗(yàn)水溫為18.0-20.0°C時(shí)，鱖初孵仔魚消化道僅為一段位于脊索下方、卵黃囊上方的實(shí)心細(xì)胞索，卵黃囊呈橢圓形，含有油球。孵化后第2天，口和肛門形成，消化道貫通。孵化后第4天，消化道上皮細(xì)胞出現(xiàn)分化，肝臟和胰臟出現(xiàn)，仔魚開始由內(nèi)源性營養(yǎng)向外源性營養(yǎng)轉(zhuǎn)變。孵化后第5天，仔魚開口攝食，消

2、化道分化成口咽腔、食道、胃、前腸和后腸。孵化后第9天，卵黃囊完全被吸收。此后隨著魚體的生長(zhǎng)，消化系統(tǒng)從結(jié)構(gòu)和功能上逐步地發(fā)育完善和成熟。孵化后第7天前腸中出現(xiàn)空泡，孵化后第8天仔魚后腸中發(fā)現(xiàn)有嗜曙紅顆粒，表明腸上皮細(xì)胞吸收了脂肪和蛋白質(zhì)。在孵化后第13天，出現(xiàn)胃腺，標(biāo)志著稚魚期的開始。 胃蛋白酶原是胃蛋白酶的前體，是胃里具有消化功能的蛋白酶原，屬于天冬氨酸蛋白酶家族。脊椎動(dòng)物胃蛋白酶原一般在胃粘膜中合成，在酸性條件下轉(zhuǎn)變成有活性

3、的胃蛋白酶。鱖為典型的肉食性魚類，自開食起終生以活魚蝦為食，為了解鱖胃蛋白酶原基因的分子特征，利用RT-PCR和cDNA末端快速擴(kuò)增法(RACE)克隆了鱖胃蛋白酶原基因cDNA全長(zhǎng)序列，并對(duì)該基因的結(jié)構(gòu)特征和系統(tǒng)進(jìn)化關(guān)系進(jìn)行了分析。結(jié)果表明，鱖胃蛋白酶原基因cDNA序列全長(zhǎng)1367bp，5’端非翻譯區(qū)43 bp，3’端非翻譯區(qū)187 bp，開放閱讀框(ORF)1137 bp，共編碼378個(gè)氨基酸。鱖胃蛋白酶原氨基末端存在信號(hào)肽和激活肽序

4、列，序列中含有催化活性必需的2個(gè)天冬氨酸殘基和構(gòu)成二硫鍵的6個(gè)半胱氨酸殘基。鱖胃蛋白酶原氨基酸序列與其他脊椎動(dòng)物胃蛋白酶原氨基酸序列的同源性為42.9％～87.3％，表明胃蛋白酶原基因在脊椎動(dòng)物的長(zhǎng)期進(jìn)化中比較保守。鱖與其他脊椎動(dòng)物胃蛋白酶原氨基酸序列的NJ系統(tǒng)進(jìn)化樹表明：除了美洲紅點(diǎn)鮭和斜帶石斑魚的C型胃蛋白酶原屬C型外，其他魚類的胃蛋白酶原單獨(dú)聚為一支，其中鱖胃蛋白酶原與美洲黃蓋碟胃蛋白酶原AIIa的親緣關(guān)系最近，推測(cè)本研究獲得的胃