前納豆激酶原基因的克隆與表達.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、納豆激酶(nattokinase簡稱NK)是一種枯草芽孢桿菌蛋白激酶，是在納豆發(fā)酵過程中由枯草芽孢桿菌產(chǎn)生的一種絲氨酸蛋白酶，該酶具有強烈溶栓活性。本研究的目的是克隆前納豆激酶原基因，實現(xiàn)其在大腸桿菌中的表達，并對其表達條件進行研究。方法是從枯草芽胞桿菌中分離純化基因組DNA作為模板，通過PcR擴增前納豆激酶原基因，將其克隆到質(zhì)粒pUCl9中，構建重組克隆質(zhì)粒pNK并轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5 α，序列分析結(jié)果表明，所克隆片段全長1152bp，

2、與Gerlebank中已報道序列相比較，同源性達到100[％]。將目的基因片段分別與表達載體pBV220和pET30a連接，構建重組表達質(zhì)粒pBNK和pENK，分別轉(zhuǎn)化大腸桿菌HBlol和BL21(DE3)，用溫度誘導轉(zhuǎn)化菌pBNK6-HBI01，表達產(chǎn)物經(jīng)SDS-PAGE電泳觀察到了特異條帶，不同誘導溫度、時間及培養(yǎng)基比較實驗結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)化菌pBNK6-HBl01在BL培養(yǎng)基中30℃培養(yǎng)，42℃誘導7小時表達量達到最大，約占菌體總蛋白

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