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文檔簡介
1、該文以Bacillus natto基因組DNA為模板,通過PCR擴增NK的全長基因,并實現(xiàn)了其在蛋白酶缺陷型枯草桿菌中的高效表達.經(jīng)超濾濃縮、凝膠過濾層析、離子交換層析,純化獲得純度為95﹪、比活性11.2×10<'4>IU/mg的rNK,產(chǎn)率為125mg/L.血小板聚集依賴于其特有的功能性受體GPⅡb/Ⅲa的存在.國內(nèi)外根據(jù)RGD三肽序列已設(shè)計了許多GPⅡb/Ⅲa受體阻斷劑,用于抑制血小板的聚集.因此,在獲得重組NK的基礎(chǔ)上,我們運用
2、計算機輔助分子模擬的方法建立了NK的空間結(jié)構(gòu)模型,結(jié)合功能信息合理設(shè)計新型NK分子,采用基因工程和蛋白質(zhì)工程方法在NK分子表面非功能的loop區(qū)引入RGD肽,經(jīng)表達純化后用于生物學(xué)性質(zhì)研究.結(jié)果顯示該衍生物在保持野生型NK相同纖溶活性的同時,尚能顯著抑制血小板聚集,具有溶栓與防栓雙重功能.結(jié)果顯示,pro肽在體內(nèi)體外,通過分子內(nèi)或分子間的方式均能幫助NK分子的折疊與再折疊,作為一種分子內(nèi)的分子伴侶（intramolecular chap
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