重組人LFA3-抗體融合蛋白在健康受試者和銀屑病患者體內的藥物動力學和藥效學初步研究.pdf

1、目的:建立一種注射用重組人LFA3-抗體融合蛋白(rhLFA3IgFP,上?？贵w工程技術研究中心研制)藥物濃度測定方法,并采用此方法測定血清中該受試藥物濃度,進而初步探索注射用rhLFA3IgFP在健康受試者及慢性尋常型中重度銀屑病患者人體內的藥物動力學和藥效學規(guī)律。 方法: 第一部分是方法學研究,摸索血清中注射用rhLFA3IgFP濃度測定方法并加以驗證； 第二部分是一個開放性的劑量遞增單次給藥試驗,24名健康

2、受試者每8人一組,按照醫(yī)生接診時間先后分成三個組,分別接受單次肌肉注射5mg、15mg和25mg劑量的注射用rhLFA3IgFP,并留取不同時間點的血清樣本進行血藥濃度測定； 第三部分為一組開放性的恒定劑量多次給藥試驗,12名慢性尋常型中重度銀屑病患者,每人接受每周1次,每次1.5mg,連續(xù)8周的注射用rhLFA3IgFP肌肉注射試驗性治療,同樣留取血清樣本進行血藥濃度測定,及留取抗凝血檢測淋巴細胞亞型(CD4+和CD8+)。淋

3、巴細胞亞型CD4+和CD8+使用流式細胞儀(FCM)檢測,血清注射用rhLFA3IgFP濃度通過新建的酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測,藥物動力學參數(shù)采用國內常用的3p97應用軟件包計算,統(tǒng)計分析使用SPSS 13.0軟件包,具體的統(tǒng)計方法涉及Student's t-test,LSD-test,非參數(shù)秩檢驗(Wilcoxon Test)及方差分析(AVONA),P<0.05定義為有顯著性統(tǒng)計學意義。 結果:新建的ELISA方法是

4、將抗人CD58單克隆抗體包被于酶標板,該抗體可以俘獲待檢樣品中的注射用rhLFA3IgFP,檢測抗體為針對另一表位的辣根過氧化物酶(HRP)標記的抗人CD58單克隆抗體,可與被俘獲的注射用rhLFA3IgFP特異結合。再加入HRP底物后,顯色反應強度與俘獲的注射用rhLFA3IgFP成正相關,因此可用于檢測樣品中注射用rhLFA3IgFP的含量。方法學確證研究表明本法測定血清注射用rhLFA3IgFP的特異性、靈敏度、測量范圍、精密度和

5、回收率均符合臨床藥物動力學研究的要求。用該方法測定的血藥濃度經軟件分析顯示,單次給藥后藥物濃度一時間曲線符合一房室開放模型,AUC0-1200h(用藥后能檢測出藥物濃度的最長時間點為給藥后1200小時)與劑量呈線性相關,三組間平均峰濃度(Cmax)與劑量的比值基本相等。組與組之間清除率(Cls/F)、消除半衰期(T1/2ke)不存在顯著性差異,T1/2ke約為11天左右,給藥后可以很快觀察到一過性、輕微的T淋巴細胞亞型CD4+和CD8+

6、百分比的降低。在恒定劑量多次給藥組,8次用藥后藥物濃度-時間曲線符合-房室開放模型,T1/2ke為307.9±32.7h,即約為11～14d。中重度尋常型銀屑病患者血清藥物濃度,平均在第4次給藥后(首次給藥后的第28天)達穩(wěn)態(tài)水平。CD4+和CD8+淋巴細胞計數(shù)在給藥后迅速下降并在給藥期間保持低水平,停藥后很快恢復至基線期正常水平。 結論:本課題研究中新建立的血清藥物濃度測定方法簡單、可靠、有效,符合實驗要求；注射用rhLFA3