葛根素及銀杏葉提取物對視網(wǎng)膜、脈絡(luò)膜血流影響的臨床及實驗研究.pdf

1、目的：1.總結(jié)分析涼血化瘀方加減對滲出性年齡相關(guān)性黃斑變性(age related macular degeneration，AMD)的治療作用及遠(yuǎn)期效果。2.探討涼血化瘀方成藥(明睛顆粒)對實驗性脈絡(luò)膜新生血管(choroidal neovascularization，CNV)的療效觀察及作用機制。
　　方法：1.回顧性總結(jié)分析2005年1月-2010年4月到唐由之研究員門診就診且至少一只眼診斷為滲出性AMD的單純服用涼血化瘀加

2、減方全部患者，設(shè)定納入、排除標(biāo)準(zhǔn)，對初診及治療后1個月、3個月、6個月、12個月患者視力、眼底情況、OCT分別評價分析。2。采用視網(wǎng)膜下注射Matrigel的方法建立實驗性CNV模型，通過眼底彩照、FFA、脈絡(luò)膜鋪片、組織病理改變分別進(jìn)行評價分析，確定Matrigel最佳濃度及操作方法。3.將40只青紫藍(lán)兔隨機分為空白對照組、模型組、明睛顆粒高、中、低劑量組，視網(wǎng)膜下注射Matrigel后連續(xù)觀察28天，通過眼底彩照、FFA、組織切片對

3、治療效果進(jìn)行評價；通過免疫組織化學(xué)檢測CD14和CD206陽性細(xì)胞在玻璃體、視網(wǎng)膜及脈絡(luò)膜的表達(dá)情況。4.以SPF級70只C57BL/6小鼠作為研究對象，以激光誘導(dǎo)CNV形成作為模型建立方法，采用冰凍組織切片及免疫熒光雙標(biāo)技術(shù)觀察新生血管在激光斑處的增生情況、VEGF的表達(dá)以及巨噬細(xì)胞的分布及表型分析，觀察明睛顆粒對上述指標(biāo)的影響作用。
　　結(jié)果：1.接受涼血化瘀方加減治療滲出性AMD的患者1個月后視力即有顯著性提高(p<0.05

4、)，連續(xù)治療3個月視力提高大于兩行者占16.13％，眼底出血及滲出的情況在84.34％患者中有好轉(zhuǎn)乃至痊愈，平均視網(wǎng)膜厚度在3個月時也有明顯減少(p<0.05)。2.從FFA來看，Matrigel40μl和20μl組從7天起出現(xiàn)熒光滲漏，14、28天逐漸增強；10μl組14和28天出現(xiàn)熒光滲漏，5μ1組一直未見明顯熒光素滲漏。從眼底情況來看，7天時大部分注射部位的視網(wǎng)膜已貼附回去，僅個別眼出現(xiàn)局限性視網(wǎng)膜脫離，Matrigel40μ1組

5、個別眼視網(wǎng)膜增殖明顯，造成牽拉性視網(wǎng)膜脫離。因白內(nèi)障或玻璃體渾濁無法進(jìn)行眼底彩照和造影多出現(xiàn)在Matrigel40μl組。從組織病理學(xué)觀察，小血管和/或幼稚纖維組織增生多見于Matrigel40μl和20μl組。但Matrigel40μ l組視網(wǎng)膜損傷明顯。3.從FFA來看，明睛顆粒大、中、小三個劑量均能有效減少病變部位熒光滲漏的面積(p<0.05)。從組織病理學(xué)評價來看，明睛顆粒對視網(wǎng)膜下注射Matrigel誘發(fā)受試動物眼底病變有一定

6、的治療作用，中劑量組效果最明顯，低劑量組和高劑量組均次之。從免疫組化標(biāo)記單核細(xì)胞(CD14+)和Ⅱ型巨噬細(xì)胞(CD206+)結(jié)果來看，模型組CD14+細(xì)胞明顯增多(p<0.05)，而CD206+細(xì)胞較少；與模型組比較，明睛顆粒治療組的CD14+細(xì)胞沒有明顯減少，但CD206+細(xì)胞顯著性增多(p<0.05)。4.在激光誘導(dǎo)實驗性CNV模型中，造模后7天可見CD105+內(nèi)皮細(xì)胞(新生血管)少量表達(dá)，14、28天逐漸增多。VEGF在新生血管團(tuán)

7、附近7天時有一定表達(dá)，14天時最明顯，28天時有所減少。F4/80+細(xì)胞(成熟巨噬細(xì)胞標(biāo)志物)在新生血管團(tuán)附近隨時間延長逐漸增多，以CD32+細(xì)胞(Ⅰ型巨噬細(xì)胞)為主，28天時可見少量CD206+細(xì)胞。明睛顆粒干預(yù)治療后可明顯控制新生血管的增生，減少VEGF表達(dá)，病變處以CD206+細(xì)胞為主。
　　結(jié)論：1.涼血化瘀方通過快速有效地減少視網(wǎng)膜出血、滲出及水腫從而在一定程度上改善視力，觀察12個月視力保持穩(wěn)定。2。Matrigel視