外周血單個核細(xì)胞移植與骨髓干細(xì)胞動員治療心肌梗死后心力衰竭的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：通過動物實(shí)驗(yàn)觀察外周血單個核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cells，PBMCs)移植及重組人粒細(xì)胞集落刺激因子(recombinant human granulocytecolony-stimulating factor，rhG-CSF)動員骨髓干細(xì)胞對兔心肌梗死后心功能及梗死區(qū)周邊血管新生的影響。 方法： 以5月齡健康大耳兔為研究對象。將實(shí)驗(yàn)動物隨機(jī)分為3組，每組15只。組I為

2、急性心肌梗死對照組，組II為PBMCs移植治療組，組III為rhG-CSF動員治療組。組I在結(jié)扎左冠狀動脈前降支造成心肌梗死后不予以任何治療；組II經(jīng)Ficoll密度梯度離心法分離PBMCs，與Brdu共培養(yǎng)48 h以標(biāo)記細(xì)胞核，在心肌梗死模型制備成功后30 min給予PBMCs移植治療；組III在心肌梗死后給予rhG-CSF30μg·kg-1·d-1皮下注射，共5天。于術(shù)前及術(shù)后1周、6周末采用超聲心動圖測定左心室舒張末內(nèi)徑(left

3、 ventricular end-diastolic diameter，LVEDd)及左心室射血分?jǐn)?shù)(left ventricular ejection fraction，LVEF)。所有兔在心肌梗死6周后處死，取心臟做病理切片。采用HE(蘇木素-伊紅)染色測量心肌梗死面積。免疫組織化學(xué)法觀察組II移植細(xì)胞在梗死區(qū)的生長和分化情況及3組實(shí)驗(yàn)動物梗死區(qū)周邊新生毛細(xì)血管密度。 結(jié)果： 1、組II經(jīng)Ficoll密度梯度離心法成

4、功從外周血分離到形態(tài)較一致的圓形單個核細(xì)胞。 2、術(shù)前超聲心動圖顯示：組I、組II和組III兔LVEDd分別為12.98±1.38 mm、12.72±1.04 mm、12.94±1.37 mm，LVEF分別為79.84±3.55％、79.80±3.59％、80.31±3.64％，各組之間差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。術(shù)后第1周末超聲心動圖顯示：組I、組II和組Ⅲ兔LVEDd分別為17.77±1.59 mm、16.87±1.2

5、8 mm、17.02±1.64 mm，LVEF分別為50.98±6.78％、52.14±5.61％、53.72±4.91％。3組實(shí)驗(yàn)動物心梗后1周LVEF與術(shù)前比較均顯著下降(P<0.01)。術(shù)后第6周末超聲心動圖顯示：組I、組II和組Ⅲ兔LVEDd分別為17.71±1.64 mm、16.03±0.94 mm、15.97±1.52 mm，LVEF分別為50.89±8.32％、57.54±5.60％、56.43±5.77％。與急性心肌梗死

6、對照組相比，PBMCs移植和rhG-CSF動員均能縮短LVEDd(P<0.01)、提高LVEF(P<0.05)，而兩個治療組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。 3、HE染色顯示：組I、組II和組III兔的心肌梗死面積分別為37.15±2.94％、26.87±2.33％、27.47±2.13％，與急性心肌梗死對照組相比，PBMCs移植和rhG-CSF動員均能縮小梗死面積(P<0.01)。 4、鼠抗Brdu單克隆抗體染色顯示

7、：組II在細(xì)胞移植術(shù)后6周可看到壞死的心肌組織內(nèi)存在Brdu標(biāo)記陽性的移植細(xì)胞。主要位于局部注射部位，呈局灶狀無序生長，細(xì)胞核棕染，形態(tài)與正常心肌細(xì)胞有差異。 5、鼠抗VIII因子相關(guān)抗原單克隆抗體染色顯示：組I、組II和組III兔梗死中心區(qū)新生毛細(xì)血管密度(條/HP)分別為2.54±1.27、8.40±1.96、6.20±1.26，梗死邊緣區(qū)新生毛細(xì)血管密度分別為13.69±2.93、25.33±3.75、22.87±2.70