高血壓大鼠左心室肥大心肌細(xì)胞中Src表達(dá)的研究.pdf

1、目的：通過(guò)檢測(cè)c—Src在高血壓大白鼠左心室肥大心肌細(xì)胞中表達(dá)和定位的變化，表明c—Src參與了高血壓心臟肥大重塑時(shí)心肌細(xì)胞信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)，探討Src在慢性壓力負(fù)荷下左心室肥大發(fā)病機(jī)制中的作用。 方法： 1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：以2、6、12、24月齡的自發(fā)性高血壓（Spontaneously Hypertensive，SH）大白鼠為研究對(duì)象，按月齡分組，每月齡各6只。相同月齡Wistar—Kyoto（WKY）大白鼠為對(duì)照組，按月齡分

2、組，每月齡各6只。 2、蛋白質(zhì)分離和蛋白質(zhì)印跡（Western Blotting，WB）方法：將左心室組織分別制成含有總蛋白、胞質(zhì)蛋白、膜蛋白和核蛋白的組織勻漿，檢測(cè)c—Src在各月齡SH大白鼠左心室組織各細(xì)胞成份中的表達(dá)。 3、免疫熒光染色方法和共聚焦顯微鏡觀察：對(duì)SH大白鼠左心室組織冰凍切片進(jìn)行免疫熒光標(biāo)記，通過(guò)共聚焦顯微鏡觀察c—Src在心肌細(xì)胞中的分布。 4、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：采用SPSS13．0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)

3、據(jù)分析。各月齡組中SH大白鼠左心室組織c—Src的表達(dá)量與相應(yīng)的WKY對(duì)照組進(jìn)行兩樣本顯著性差異比較采用t檢驗(yàn)，各月齡組之間SH大白鼠左心室組織中c—Src的表達(dá)量顯著性差異比較采用單因素方差分析（one—way ANOVA），P<0．05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果： 1、WB結(jié)果顯示：c—Src在各月齡SH組大白鼠左心室心肌組織勻漿（總蛋白）中的表達(dá)與相同月齡WKY組大白鼠相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；但是，在左心室心肌組織

4、抽提的細(xì)胞質(zhì)蛋白勻漿中，各月齡SH組與相同月齡WKY組比較，2月齡時(shí)差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，在6、12、24月齡時(shí)，SH組比WKY組均有顯著性減少；而在左心室心肌組織抽提的膜蛋白勻漿中，各月齡SH組與相同月齡WKY組比較，在2月齡時(shí)差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，在6、12、24月齡時(shí)SH組比WKY組顯著性增加；在各月齡SH組大白鼠左心室心肌組織抽提的核蛋白勻漿中的表達(dá)與相同月齡WKY組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2、免疫熒光染色結(jié)果顯示：2月齡時(shí)，S

5、H大白鼠與WKY大白鼠心肌細(xì)胞中c—Src的熒光分布基本相似，心肌細(xì)胞胞漿出現(xiàn)彌漫性較均勻分布的綠色熒光，核內(nèi)有極弱的小顆粒點(diǎn)狀熒光，在WKY大白鼠心肌細(xì)胞中，這一熒光分布特征在6、12和24月齡均無(wú)明顯變化，但在SH大白鼠心肌細(xì)胞中，在6、12和24月齡有明顯的定位變化，表現(xiàn)為細(xì)胞漿內(nèi)的熒光稍有減弱、分布不均一并向細(xì)胞膜（尤其是閏盤）和核膜及核周聚集現(xiàn)象，于是在心肌細(xì)胞閏盤觀察到明亮的線狀熒光和細(xì)胞核膜附近區(qū)域出現(xiàn)明亮的熒光顆粒。