不同黃芪劑量的補(bǔ)陽(yáng)還五湯治療腦梗死的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　 腦梗死是一種常見的閉塞性腦血管病。占全部腦血管病的60％，其致死率和致殘率高，是危害人類健康的重要疾病之一。補(bǔ)陽(yáng)還五湯(簡(jiǎn)稱BHD)是目前治療腦缺血病應(yīng)用最多的方劑。黃芪在方中的配伍劑量是本方療效發(fā)揮的關(guān)鍵問題，因此找出特定藥效條件下的補(bǔ)陽(yáng)還五湯中黃芪的最佳用量，并對(duì)其治療實(shí)驗(yàn)性腦梗死作用機(jī)理進(jìn)行初步探討，為臨床上該方防治缺血性腦血管疾病提供藥理學(xué)依據(jù)。
　　 材料與方法：
　　 第一部分：不同黃芪

2、劑量的BHD對(duì)實(shí)驗(yàn)性腦缺血大鼠防治作用的藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)
　　 1.動(dòng)物及分組
　　 健康成年Sprague-Dawley(SD)大鼠隨機(jī)分成9組。
　　 2.給藥方法
　　 補(bǔ)陽(yáng)還五湯采用灌胃法，連續(xù)給藥7d，最后1次給藥30min后，實(shí)施腦缺血手術(shù)；假手術(shù)組和模型組分別灌以等量的生理鹽水；尼莫地平(1mg·kg-1)術(shù)前30min皮下注射。
　　 3.動(dòng)物模型制備
　　 采用改良Longa法

3、制作MCAO模型。
　　 4.指標(biāo)測(cè)定
　　 4.1神經(jīng)功能指標(biāo)的測(cè)定：由三位不了解分組情況的觀察者評(píng)估并記錄神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分。參照文獻(xiàn)作適當(dāng)改動(dòng)，將大鼠行為分為6個(gè)等級(jí)評(píng)分。
　　 4.2腦梗死灶測(cè)量：各組大鼠每組取5只大腦，剝離腦膜，腦塊冰凍數(shù)分鐘后，自距額極2mm開始，以視交叉水平為中心，間隔2mm做連續(xù)冠狀切片(片厚約2mm)，每個(gè)腦塊切5-6片，置于1％TTC溶液中，37℃避光孵育15min。數(shù)碼相機(jī)(C

4、anon DigitalIXUS430)在相等焦距下(鏡頭距組織塊的距離相等)拍照。取TTC染色后攝像所得之圖像，應(yīng)用imageJ圖像信號(hào)采集與分析系統(tǒng)作圖像分析。
　　 4.3普通光鏡(HE)組織樣品制作：將放入4％多聚甲醛溶液中固定的大鼠大腦分組別從固定液中取出，切取病變組織。右側(cè)大腦自額極至枕葉分為A、B、C、D、E共5等分，取B腦片放入組織筐。再放入盛滿蒸餾水的玻璃杯中沖洗完畢后進(jìn)行H-E染色，后用奧林巴斯BS-51顯微

5、鏡觀察。
　　 第二部分：不同黃芪劑量的BHD對(duì)腦缺血大鼠血清IL-1、IL-6、IL-10的影響
　　 測(cè)定IL-1、IL-6、IL-10 OD值：ELISA法檢測(cè)。將每組大鼠腹豐動(dòng)脈取血靜置后用C412型常溫高速離心機(jī)(法國(guó)捷安)低速離心，提取血清。放入圓錐形塑料管中，蓋好上蓋密封，-20℃冷凍保存。測(cè)定時(shí)把冷凍血清取出，按試劑盒說明書測(cè)定IL-1、IL-6、IL-10的OD值。通過公式將IL-1、IL-6、IL-1

6、0的OD值轉(zhuǎn)換成濃度值。
　　 結(jié)果：
　　 第一部分
　　 1.在神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分中：正常組與假手術(shù)組無區(qū)別(P>0.05)，低于其余七組(P<0.01)，尼莫地平組與黃芪用量180g組、黃芪用量240g組三組間無區(qū)別(P>0.05)，低于其余六組(P<0.01)，黃芪用量120g組、黃芪用量60g組、黃芪用量30g組、模型組四組間有區(qū)別(P<0.01)且評(píng)分越來越高。
　　 2.在腦梗死體積占全腦體積百

7、分比中：正常組與假手術(shù)組無區(qū)別(P>0.05)，低于其余七組(P<0.01)，尼莫地平組與黃芪用量180g組、黃芪用量240g組三組間無區(qū)別(P>0.05)，低于其余六組(P<0.01)，黃芪用量120g組、黃芪用量60g組、黃芪用量30g組、模型組四組間有區(qū)別(P<0.01)且百分比越來越高。
　　 第二部分
　　 1.BHD組的IL-1濃度值明顯低于模型組(P<0.01)，且隨著BHD中黃芪用量的增高濃度值呈下降趨勢(shì)

8、，模型組、黃芪用量30g組、黃芪用量60g組、黃芪用量120g組、黃芪用量180g組五組問有區(qū)別(P<0.01)；黃芪用量180g組，黃芪用量240g組、尼莫地平組三組間無區(qū)別(P>0.05)，但仍高于正常組與假手術(shù)組(P<0.01)。
　　 2.BHD組的IL-6濃度值明顯低于模型組(P<0.01)，且隨著BHD中黃芪用量的增高濃度值呈下降趨勢(shì)，模型組、黃芪用量30g組、黃芪用量60g組、黃芪用量120g組、黃芪用量180g組

9、五組問有區(qū)別(P<0.01)；黃芪用量180g組、黃芪用量240g組、尼莫地平組三組間無區(qū)別(P>0.05)，但仍高于正常組與假手術(shù)組(P<0.01)。
　　 3.BHD組的IL-10濃度值明顯高于模型組(P<0.01)，且隨著BHD中黃芪用量的增高濃度值呈增加趨勢(shì)，模型組、黃芪用量30g組、黃芪用量60g組、黃芪用量120g組、黃芪用量180g組五組間有區(qū)別(P<0.01)：黃芪用量180g組、黃芪用量240g組、尼莫地平組三