加味四逆散對慢性疲勞綜合征模型小鼠線粒體和IL-2的影響.pdf

1、　　目的：研究加味四逆散對慢性疲勞綜合征(CFS)模型造模過程中小鼠行為學(xué)、肝臟、肌肉和腎上腺病理學(xué)、大腦額葉皮層、海馬線粒體和血清 IL-2 的影響。
　　方法：將 70 只昆明種小鼠,雌性,體重 17-22g,適應(yīng)性飼養(yǎng) 2 天后以隨機(jī)數(shù)字表法分為對照組、模型組、加味四逆散大劑量組、加味四逆散小劑量組、人參組、鹽酸帕羅西汀組。除對照組外各組小鼠均接受46 天各種不同的應(yīng)激,包括電針(疏密波,以小鼠能耐受為度,一次 10秒,

2、每只 5 次)、強(qiáng)迫游泳(19℃,水深 40cm,小鼠力竭為止),滾筒(60轉(zhuǎn)/分鐘,每組 10 分鐘)、懸尾(從每組 10 分鐘開始,漸次延長)。各組小鼠每 3 天稱體重,每 7 天以 Open-Field 法測定動(dòng)物行為學(xué)的變化。造模結(jié)束后,以隨機(jī)數(shù)字表法選取造模組 3 只,對照組 2 只做電鏡切片和石蠟切片,其余各組小鼠飼養(yǎng) 4 天后,進(jìn)行藥物治療。加味四逆散小劑量組以 8.64g 原藥溶于 10ml 生理鹽水,每 10g 體重小

3、鼠灌胃 0.1ml；加味四逆散大劑量組以 25.91g 原藥溶于 20ml 生理鹽水,每 10g 體重小鼠灌胃 0.2ml；人參組以 5g 人參顆粒溶于 38.5ml 生理鹽水,每 10g 體重小鼠灌胃 0.1ml；鹽酸帕羅西汀組以 20mg 鹽酸帕羅西汀片溶于 77ml 生理鹽水中,每 10g 體重小鼠灌胃 0.1ml；對照組和模型組每 10g 體重小鼠灌胃0.1ml 生理鹽水,共治療 7 天。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物于末次給藥后禁食,不禁水,次日取

4、材。制作大腦左側(cè)額葉皮層、海馬電鏡切片；制作肝臟、肌肉和腎上腺石蠟切片；以小鼠 IL-2ELISA 試劑盒測定血清 IL-2 含量。
　　結(jié)果：與模型各組比,造模前對照組體重低于加味四逆散小劑量組和人參組,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；造模后對照組小鼠體重高于造模各組,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；造模前對照組小鼠 Open-Field評分低于造模各組,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05) ,造模后對照組小鼠Open-F

5、ield 評分高于造模各組,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。治療第 1天與第 3 天,對照組與模型組小鼠體重差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。治療第 7 天各組小鼠體重差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。造模第 1 天,對照組和模型 組 小 鼠與 其 余各 組 比 較, Open-Field 評 分差 異 無統(tǒng) 計(jì) 學(xué) 意 義(P>0.05)。造模第 20 天,加味四逆散大劑量組、加味四逆散小劑量組、人參組、鹽酸帕羅西汀組小鼠水平評分

6、與對照組比較差異顯著,且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。造模第 28 天,人參組、鹽酸帕羅西汀組小鼠水平運(yùn)動(dòng)評分與對照組比較統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著(P<0.01)；加味四逆散小劑量組水平運(yùn)動(dòng)評分與對照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；模型組、人參組、鹽酸帕羅西汀組小鼠垂直運(yùn)動(dòng)評分低于對照組,且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。造模第 38 天,模型組、加味四逆散大劑量組、加味四逆散小劑量組、鹽酸帕羅西汀組小鼠垂直評分低于對照組,且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

7、P<0.05)。治療結(jié)束后,加味四逆散大劑量組小鼠水平評分高于模型組,且統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著(P<0.001)；加味四逆散小劑量組小鼠水平評分高于模型組,且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　模型組、加味四逆散大劑量組、加味四逆散小劑量組、人參組、鹽酸帕羅西汀組小鼠 IL-2 含量高于對照組,且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。加味四逆散大劑量組、人參組、鹽酸帕羅西汀組小鼠 IL-2 含量低于模型組,且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05, P<

8、0.01)。
　　小鼠額葉和海馬 CA1 區(qū)電鏡觀察：CFS 模型小鼠額葉和海馬 CA1 區(qū)細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)線粒體外膜損傷、嵴水腫、數(shù)目增多等線粒體損傷的表現(xiàn)。加味四逆散大劑量治療組小鼠海馬 CA1 區(qū)線粒體膜清晰,線粒體嵴清晰可見。
　　光鏡觀察：CFS 模型小鼠肝細(xì)胞排列疏松,部分肝細(xì)胞水腫或肝細(xì)胞壞死。加味四逆散大劑量治療組肝細(xì)胞排列緊密,肝索明顯可見,肝細(xì)胞核清晰可見,細(xì)胞質(zhì)著色明顯。CFS 模型小鼠肌束排列不均,

9、多處肌纖維束碎裂消失。加味四逆散大、小劑量組小鼠束排列緊密,細(xì)胞核位于膜內(nèi),肌束較粗,肌橫紋可見。CFS 模型小鼠腎上腺球狀帶細(xì)胞核增大且深染,束狀帶組織內(nèi)空泡增多。加味四逆散大劑量治療組腎上腺細(xì)胞排列緊密,球狀帶細(xì)胞核聚集且存在少許空泡,束狀帶細(xì)胞體積較大,胞質(zhì)染色相對較淺。
　　結(jié)論：慢性不可預(yù)見的中高等強(qiáng)度應(yīng)激能誘導(dǎo)慢性疲勞綜合征模型,小鼠在造模過程中體重降低；模型小鼠的水平運(yùn)動(dòng)能力和垂直運(yùn)動(dòng)能力下降。加味四逆散可提高