HSP20與高爾基體在沙鼠前腦缺血再灌注后的變化及其作用機(jī)制的研究.pdf

1、目的:探討在沙鼠腦缺血再灌注模型中,HSP20表達(dá)變化及可能的神經(jīng)保護(hù)作用及作用機(jī)制,檢測(cè)高爾基體蛋白表達(dá)變化及HSP20與高爾基體的定位關(guān)系。
　　方法:通過夾閉雙側(cè)頸總動(dòng)脈的方法建立沙鼠腦缺血再灌注模型;60只沙鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、假手術(shù)組、缺血再灌注組。缺血再灌注組在缺血再灌注后(IR)6小時(shí)(6h)、1天(1d)、3天(3d)、7天(7d)的各時(shí)間點(diǎn)分批處死動(dòng)物,快速取腦組織,分別制作石蠟標(biāo)本和提取蛋白,采用HE染色觀察

2、皮質(zhì)區(qū)神經(jīng)細(xì)胞變化;采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)皮質(zhì)區(qū)HSP20陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目;采用免疫印跡技術(shù),觀察高爾基體及HSP20蛋白表達(dá)變化情況;采用免疫熒光共聚焦的方法觀察腦皮質(zhì)細(xì)胞中HSP20與高爾基體的定位情況。全部數(shù)據(jù)用SPSS16.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　結(jié)果:HE染色:正常對(duì)照組和各假手術(shù)組的腦組織形態(tài)結(jié)構(gòu)沒有明顯的變化;腦缺血再灌注組根據(jù)時(shí)間點(diǎn)的不同可見膠質(zhì)細(xì)胞增生、肥大,細(xì)胞間質(zhì)和細(xì)胞水腫,神經(jīng)元壞死。免疫組化染色HSP20的表

3、達(dá):正常對(duì)照組和各假手術(shù)組的腦組織中均有HSP20的表達(dá),但表達(dá)較低。缺血再灌注損傷后HSP20的表達(dá)上調(diào),于第三天達(dá)到高峰,七天開始下降但仍高于正常組和假手術(shù)組(正常組和假手術(shù)組比較p<0.05,不同時(shí)間點(diǎn)比較p<0.05)。免疫熒光共聚焦:高爾基體特異性標(biāo)志物TGN38的免疫熒光及HSP20的免疫熒光在蒙古沙鼠皮質(zhì)細(xì)胞內(nèi)明顯重疊。免疫印跡結(jié)果:我們通過免疫印跡的方法再次證實(shí)了在沙鼠前腦缺血再灌注后HSP20后的表達(dá)變化(變化趨勢(shì)同免