一個(gè)新的ERM家族分子的鑒定及對(duì)細(xì)胞形態(tài)的影響.pdf

1、目的：制備抗hErmin氨基端160個(gè)氨基酸（hErmin160）多克隆抗體，鑒定hErmin分子在正常成人腦組織中的表達(dá)，以及研究hErmin對(duì)細(xì)胞形態(tài)的影響，為深入研究hErmin分子的功能奠定基礎(chǔ)。
　　方法：PCR擴(kuò)增編碼hErmin160的核苷酸序列，克隆入原核表達(dá)載體pET41-b(+)，轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)pLysS，IPTG誘導(dǎo)表達(dá)hErmin160融合蛋白，表達(dá)產(chǎn)物用SDS-PAGE和Western-b

2、lot進(jìn)行鑒定，經(jīng)鎳柱純化后，免疫家兔，制備其抗血清，并對(duì)免疫后抗血清進(jìn)行親和純化，用Western-blot檢測(cè)抗體純化的效果；用純化的抗hErmin160多克隆抗體為一抗，分別用Western-blot法和免疫組織化學(xué)法對(duì)hErmin分子在正常成人腦組織中的表達(dá)進(jìn)行鑒定；通過轉(zhuǎn)染，在體外培養(yǎng)的細(xì)胞中過表達(dá)hErmin分子，用細(xì)胞免疫熒光法觀察hErmin分子對(duì)細(xì)胞形態(tài)的影響。
　　結(jié)果：測(cè)序證實(shí)獲得hErmin氨基端前160個(gè)

3、氨基酸的編碼序列；SDS-PAGE分析表明，表達(dá)產(chǎn)物的相對(duì)分子質(zhì)量為51ku，與理論值相符；灰度掃描分析hErmin160融合蛋白的表達(dá)量占上清中菌體蛋白總量的10％，純化產(chǎn)物純度達(dá)92％，Western-blot鑒定所表達(dá)的融合蛋白；抗血清和純化后的多克隆抗體Western-blot反應(yīng)均為陽性；純化所得的抗體能與真核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)的hErmin分子結(jié)合，并且hErmin分子在正常成人腦組織中的表達(dá)得到確認(rèn)；轉(zhuǎn)染過表達(dá)hErmin分子的