熱量限制對心肌細(xì)胞SIRTs表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　 1. 研究SIRTs（SIRT1-7 ）在大鼠心臟組織及H9c2 心肌細(xì)胞的定位；
　　 2. 初步探討熱量限制對心肌細(xì)胞SIRT1-7 表達(dá)的影響。
　　 方法：
　　 3個月齡健康雄雌SD 大鼠20 只，隨機(jī)分成兩組：①正常對照組（ad libitum AL ）（n=10 ）：隨意進(jìn)食；②熱量限制組（Calorie Restriction，CR ）（n=10 ）：喂養(yǎng)量為對照組的60%，

2、分別稱體重。飼養(yǎng)3 周后稱體重，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)2%的戊巴比妥麻醉后處死，取出心臟，稱重，沿心臟縱軸平均分為三份，心尖及心底部用于Western blot，對比兩組 SIRT1-7 蛋白表達(dá)水平的變化；中間部分心臟用于免疫組織化學(xué)，定性檢測 SIRT1-7 在大鼠心臟組織的定位。
　　 大鼠心肌細(xì)胞株H9c2 在含葡萄糖4.5g/L的DMEM 培養(yǎng)基中培養(yǎng)48h后傳代隨機(jī)分為兩組：①正常對照組（Control，Con ）：繼續(xù)在含葡萄

3、糖4.5g/L的DMEM中培養(yǎng)；②熱量限制組（CR ）：棄去舊培養(yǎng)液，加入含葡萄糖1g/L的DMEM。兩組細(xì)胞在5% CO2、37℃條件下繼續(xù)培養(yǎng)24h后終止。免疫細(xì)胞化學(xué)法定性檢測 SIRT1-7 在H9c2的定位；RT-PCR 法檢測SIRT1-7 mRNA 表達(dá)水平的變化。
　　 結(jié)果：
　　 1. 實驗前兩組大鼠兩兩體重的差別無統(tǒng)計學(xué)意義。心臟質(zhì)量指數(shù)（HMI ）=心臟重量/大鼠體重。實驗后CR 組大鼠體重及HM

4、I 均顯著低于 AL 組（p<0.05 ）。
　　 2. 免疫組織化學(xué)法檢測SIRT1-7 在大鼠心肌細(xì)胞定位，結(jié)果表明：SIRT1 在細(xì)胞核及細(xì)胞質(zhì)均有大量表達(dá)，以細(xì)胞核表達(dá)為主；SIRT2、SIRT3、SIRT4、SIRT5 主要在細(xì)胞質(zhì)表達(dá)；SIRT6、SIRT7 在細(xì)胞核及細(xì)胞質(zhì)均有表達(dá)，主要在細(xì)胞核表達(dá)。
　　 3. 免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測SIRT1-7 在H9c2 細(xì)胞表達(dá)定位，結(jié)果表明：SIRT1、SIRT2、

5、SIRT7 在細(xì)胞核及細(xì)胞質(zhì)均有表達(dá)，以細(xì)胞核表達(dá)為主；SIRT3、 SIRT4、 SIRT5、SIRT6在細(xì)胞質(zhì)表達(dá)為主。
　　 4. Western Blot 法檢測熱量限制對大鼠心肌細(xì)胞SIRT1-7 蛋白表達(dá)水平的影響，結(jié)果表明：CR 組SIRT1，2，3，4，7 蛋白表達(dá)水平與AL 組比較顯著增加（p<0.05 ）；SIRT5，6的蛋白表達(dá)在兩組中沒有差異。
　　 5. RT-PCR 法檢測熱量限制對H9c2

6、細(xì)胞SIRT1-7 mRNA 表達(dá)水平的影響，結(jié)果表明：
　　 其變化與大鼠心臟SIRT1-7 蛋白表達(dá)水平的變化一致。SIRT1，2，3，4，7 mRNA 表達(dá)水平與正常對照組比較明顯增加（p<0.05 ），SIRT5，6 mRNA的表達(dá)在兩組中沒有差異。
　　 結(jié)論：
　　 1. 在心肌細(xì)胞中，SIRT1 在細(xì)胞核及細(xì)胞質(zhì)均有大量表達(dá)，以細(xì)胞核表達(dá)為主；SIRT2，3，4，5 主要在細(xì)胞質(zhì)表達(dá)；SIRT6、S