低氧預適應對自體原位肝移植大鼠腸道黏膜屏障影響的實驗研究.pdf

1、l、目的：本實驗在建立大鼠自體原位肝移植模型的基礎上，術前對大鼠給予一定的低氧預適應(hypoxic preconditioning，HP)處理，通過觀察術后不同時段腸組織光鏡、電鏡下的改變；腸組織HIF-1a的表達、IgA漿細胞數(shù)量的變化；腸組織丙二醛(MDA)的測定及相應時段肝功能的變化：探討腸道黏膜屏障功能的損害與移植肝缺血再灌注早期損傷的關系，研究低氧預適應在肝移植過程中對腸道黏膜屏障的影響，從而為臨床肝臟移植采取合理的手段，減

2、輕肝臟損傷提供理論依據(jù)和可能的技術路徑。 2、方法： 2.1 SD大鼠，隨機分為3組，A組：低氧預適應自體原位肝移植組(n=50)，大鼠術前24h給予氣體流量5L/min的8％氮氧混合氣體(含氧氣8％，其余為氮氣)處理90min；B組：自體原位肝移植組(n=50)；C組：假手術組(n=8)。 2.2 A、B組大鼠均在術后1h、6h、12h、24h、48h各取8只處死，經(jīng)腹主動脈采血作肝功能檢測。自曲氏韌帶向下5c

3、m處切取小腸組織立即置液氮然后放-80℃冰箱保存待MDA檢測。另取腸組織標本，HE染色切片觀察顯微結構的變化，電鏡觀察超微結構的變化，免疫組織化學染色切片應用MiVnt顯微圖象分析系統(tǒng)觀察腸組織HIF-la的表達及IgA漿細胞數(shù)量的變化。 3、結果：． (1)大鼠手術成功的標準：大鼠即刻蘇醒、翻身，并能維持有效的乎吸、心跳。A組和B組有效大鼠例數(shù)各為50例，無肝期控制為(20±2.2)min，兩組無明顯差異(P>O.05

4、)。A、B兩組各取10只觀察術后一周生存率，A組和B組分別為90.0％(9/10)和80.0％(8/10)，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。 (2)A組、B組腸道黏膜顯微結構變化：按照Chiu等腸組織病理學評分，腸黏膜的病理變化結果顯示，A組術后各時段腸黏膜損傷較B組術后相應時段減輕，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 (3)A、B二組術后各時段腸組織HIF-la表達均增加，術后24h的表達仍維持在較高水平，48h H

5、IF-la的表達呈減退趨勢，A組各時段較B組各相應時段HIF-la的表達增加明顯。A、B二組IgA漿細胞細胞數(shù)量比較，術后24h B組即少于A組，術后48h差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 (4)人組、B組腸道黏膜超微結構變化：A組大鼠術后線粒體結構完整，線粒體嵴清晰，細胞連接緊密；B組大鼠術后部分線粒體嵴模糊、甚至消失，基質(zhì)空泡化、密度減低，細胞連接松弛、模糊。 (5)術后不同時段各項指標檢測。血清肝功能檢測顯示：A

6、、B組大鼠ALT、AST與C組相比明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義(P