NF-κB參與低氧預(yù)適應(yīng)對自體原位肝移植大鼠JNK通路的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、1、目的:本實驗采用自制的“經(jīng)門靜脈灌注法自體原位肝移植模型”,術(shù)前予大鼠低氧預(yù)適應(yīng)(hypoxia preconditioning,HP)處理,通過觀察術(shù)后不同時段肝組織丙二醛、超氧化物歧化酶水平及相應(yīng)肝功能的變化;細胞色素C、Cleaved-Caspase-3蛋白表達;肝組織p-C-JUNmRNA、NF-κB mRNA含量;肝臟光鏡、電鏡下的改變;研究低氧預(yù)適應(yīng)作用后肝細胞凋亡改變,并分析肝臟缺血再灌注損傷過程中NF-κB在JNK信

2、號傳導(dǎo)通路調(diào)節(jié)肝細胞凋亡中的作用;更進一步的探索低氧預(yù)適應(yīng)法減輕肝細胞凋亡的確切機制。
   2、方法:
   2.1將96只SD大鼠,雌雄不拘,以簡單隨機化法均分為3組:①正常對照組(NC):僅進腹分離不夾閉血管,不作其他處理。②自體移植組(AT):行自體原位肝移植。③低氧預(yù)適應(yīng)組(HP):移植前用體積分數(shù)8%氮氧混合氣體行低氧預(yù)處理90 min,然后行自體原位肝移植。
   2.2各組大鼠均在術(shù)后1、2、12

3、、24h處死,經(jīng)腔靜脈采血3ml檢測血清ALT、AST水平,硫代巴比妥酸比色法、黃嘌呤氧化酶法分別檢測大鼠肝組織超氧化物歧化酶、丙二醛水平,免疫組織化學染色法測定細胞色素C表達,Western blot法檢測Cleaved-Caspase-3蛋白表達,RT-PCR檢測p-C-JUN mRNA、NF-κB mRNA水平,并在光學顯微鏡、透射電子顯微鏡下觀察各組肝細胞形態(tài)學改變。
   3、結(jié)果:
   3.1實驗動物數(shù)量分

4、析
   所有大鼠均進入結(jié)果分析,每組32只,各組1,2,12,24 h每個時間段各取8只檢測。移植成功的標準是移植結(jié)束后,大鼠即刻蘇醒,翻身,并能維持有效呼吸、心跳。
   3.2各組大鼠術(shù)后不同時相點血清ALT和AST水平比較
   低氧預(yù)適應(yīng)組的血清ALT和AST水平顯著低于自體移植組組,但均顯著高于正常對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)
   3.3各組大鼠術(shù)后不同時相點肝組織超氧化物歧化酶

5、、丙二醛水平的變化
   與對照組比較,兩移植組各時相的肝組織丙二醛水平升高,超氧化物歧化酶水平顯著降低,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);與自體移植組比較,低氧預(yù)適應(yīng)組肝組織丙二醛水平顯著降低、超氧化物歧化酶水平顯著升高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)
   3.4各組大鼠術(shù)后不同時相點肝組織細胞色素C蛋白的表達
   低氧預(yù)適應(yīng)組各時段細胞色素C蛋白陽性表達明顯低于自體移植組,但均顯著高于正常對照組,差異有

6、統(tǒng)計學意義(P<0.05)
   3.5各組大鼠術(shù)后不同時相點肝臟組織中Cleaved-Caspase-3蛋白表達情況
   各時相自體移植組和低氧預(yù)適應(yīng)組Cleaved-Caspase-3蛋白表達水平較正常對照組顯著升高(P<0.05),術(shù)后12 h達到峰值,低氧預(yù)適應(yīng)組Cleaved-Caspase-3蛋白表達水平較自體肝移植組顯著下降(P<0.05)。
   3.6各組大鼠術(shù)后不同時相點肝臟組織中p-C-J

7、UN mRNA表達情況
   p-C-JUN rnRNA表達水平于術(shù)后1 h即開始升高,2 h達到峰值,隨后下降。術(shù)后1h、2h、12h自體移植組和低氧預(yù)適應(yīng)組p-C-JUN mRNA表達水平較正常對照組顯著升高(P<0.05),低氧預(yù)適應(yīng)組p-C-JUN mRNA表達水平較自體肝移植組顯著下降(P<0.05);術(shù)后24h p-C-JUN mRNA表達水平3組間比較,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
   3.7各組大

8、鼠術(shù)后不同時相點肝組織NF-κB mRNA的含量
   NF-κB mRNA含量于移植后1 h即開始升高,12 h達到峰值,隨后數(shù)值下降,與正常對照組比較,兩移植組各時相肝組織NF-κB mRNA含量顯著升高,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05);與自體移植組比較,低氧預(yù)適應(yīng)組肝組織NF-κB mRNA含量顯著升高,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)
   3.8各組大鼠術(shù)后肝組織顯微結(jié)構(gòu)的變化光鏡下,自體肝移植組各時段中

9、央靜脈周圍的肝細胞明顯腫脹,肝血竇變窄,而肝細胞之間的間隙變寬。低氧預(yù)適應(yīng)組的肝小葉結(jié)構(gòu)基本正常,肝組織無明顯改變。
   3.9各組大鼠術(shù)后肝組織超微結(jié)構(gòu)的變化
   自體移植組1h時段的肝細胞超微結(jié)構(gòu)未見明顯改變;2h時段,肝細胞間隙變大,線粒體腫脹明顯;12h段肝細胞濃縮,可見細胞核裂解,染色質(zhì)粗糙,核仁濃縮,線粒體嵴疏松溶解,雙層膜模糊不清;24h時段,肝細胞呈現(xiàn)固縮死亡的形態(tài),染色質(zhì)邊集,少數(shù)肝細胞內(nèi)出現(xiàn)凋亡小

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