Apelin降低小鼠低氧性肺動脈高壓的作用與NF-κB通路有關(guān).pdf

1、[目的]
　　探討apelin降低小鼠低氧性肺動脈高壓的作用與NF-κB通路的關(guān)系
　　[方法]
　　1.動物模型的建立:將野生型和NF-κB敲除型小鼠分別分為常氧組(WT、KO)和低氧組(WT+Hypoxia、KO+Hypoxia);低氧組置于常壓低氧艙內(nèi)，O2濃度控制在9％～10％，CO2濃度＜5％，每天持續(xù)23小時，連續(xù)28天。常氧組置于常壓常氧艙內(nèi)。同法將WT型小鼠分為4組，常氧(Normoxia)組、常氧加a

2、pelin組(Normoxia+apelin)、低氧組(Hypoxia)、低氧加apelin組（Hypoxia+apelin），用上述同樣方法復(fù)制HPAH小鼠模型。Hypoxia+apelin組每日早晚腹腔注射(Pyr1)-apelin-13，劑量為20nmol/kg·d，常氧組腹腔注射相同體積的生理鹽水。
　　2.模型指標(biāo)的測定:右心導(dǎo)管法檢測右心室收縮壓(RVSP);稱取右心室、左心室與室間隔的重量，計算右心肥大指數(shù)[RV/(

3、LV+S)]，Masson染色觀察小鼠肺小血管重塑情況。
　　3.小鼠血清、肺組織中炎癥因子檢測:ELISA方法檢測各組小鼠血清、肺組織中炎癥因子TNF-α、IL-1β、IL-6的水平。
　　4.小鼠肺組織中相關(guān)蛋白檢測:Western blot法檢測小鼠肺組織中血管緊張素AT-1相關(guān)蛋白APJ、核因子κB、NOD2的表達(dá)變化;并用免疫熒光檢測肺組織中NF-κB表達(dá)。
　　[結(jié)果]
　　1.WT+Hypoxia組

4、小鼠RVSP較WT組高40％(p＜0.05); KO與KO+Hypoxia兩組之間無統(tǒng)計學(xué)差異，WT+Hypoxia組顯著高于KO+Hypoxia。WT+Hypoxia組RV/(LV+S)較WT組高20％(p＜0.05); KO與KO+Hypoxia兩組小鼠之間無統(tǒng)計學(xué)差異。WT+Hypoxia組肺小血管壁顯著厚于其他組，且能看到有膠原纖維的沉積并出現(xiàn)嚴(yán)重肌化。
　　2.WT小鼠與KO小鼠的外周血清中僅TNF-α存在差異，IL-1

5、β、IL-6均無統(tǒng)計學(xué)差異;WT與WT+Hypoxia相比，KO與KO+Hypoxia相比TNF-α、IL-1β、IL-6均無顯著變化。WT小鼠與KO小鼠肺組織中TNF-α、IL-1β、IL-6均無統(tǒng)計學(xué)差異;WT+Hypoxia組比WT組高20％，比KO+Hypoxia高16％; IL-1β、IL-6之間無顯著差異。
　　3.WT+Hypoxia組小鼠肺組織中APJ的表達(dá)較WT組低50％，KO+Hypoxia組與KO組小鼠之間A

6、PJ的表達(dá)無顯著差異。
　　4.Normoxia與Normoxia+apelin組之間無統(tǒng)計學(xué)差異;Hypoxia組小鼠RVSP較Normoxia組高56％(p＜0.05);Hypoxia+apelin組較Hypoxia組低22％(p＜0.05);
　　RV/(LV+S)統(tǒng)計顯示Normoxia與Normoxia+apelin組之間無統(tǒng)計學(xué)差異;Hypoxia組小鼠RV/(LV+S)較Normoxia組高27％(p＜0.05

7、); Hypoxia組與Hypoxia+apelin之間無顯著差異。Masson結(jié)果顯示:與Hypoxia組相比，Hypoxia+apelin組的肺血管重塑及肌化情況有所緩解。
　　5.Normoxia、Hypoxia、Hypoxia+apelin三組之間血清中炎癥因子TNF-α、IL-1β、IL-6均無顯著差異;肺組織中Hypoxia組比Normoxia組的TNF-α含量高34％，比Hypoxia+apelin組高42％;肺組織

8、當(dāng)中Hypoxia組比Normoxia組的IL-1β含量高32％，比Hypoxia+apelin組高32％。
　　6.NF-κB表達(dá)情況:免疫熒光及WB法共同說明低氧增強(qiáng)肺組織NF-κB入核表達(dá)和活性，激活肺部炎癥反應(yīng)，促進(jìn)HPAH的發(fā)生。 Apelin的治療可以抑制NF-κB入核而降低其活性。
　　7.肺組織NOD2的表達(dá)情況:Hypoxia組肺組織中NOD2水平顯著高于Normoxia組，與Hypoxia組相比，Hypo