RELM-β在大鼠低氧性肺動(dòng)脈高壓中的作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：通過(guò)建立不同低氧時(shí)間的慢性常壓低氧性肺動(dòng)脈高壓（HPH）大鼠模型，觀察抵抗素樣分子β（RELM-β）在HPH大鼠肺組織及肺血管表達(dá)情況，干預(yù)HPH大鼠模型肺部RELM-β表達(dá)，研究其在低氧性肺動(dòng)脈平滑肌增殖中的作用，并探索PI3K/Akt/mTOR和PKC/MAPKs信號(hào)通路是否參與該過(guò)程的作用機(jī)制，從而為研究低氧性肺血管重塑（HPSR）提供新的理論依據(jù)。
　　方法：實(shí)驗(yàn)共分為三部分。
　　1.建立不同低氧時(shí)間（H3、

2、H7、H14、H21）慢性常壓低氧性肺動(dòng)脈高壓大鼠模型，用右心導(dǎo)管法測(cè)量大鼠平均肺動(dòng)脈壓（mPAP），稱量法計(jì)算Fulton指數(shù)（RV/LV+S），并進(jìn)行 HPSR指標(biāo)觀察；用Western-blot、熒光實(shí)時(shí)定量PCR、免疫組織化學(xué)及ELISA等方法檢測(cè)各低氧時(shí)間組肺組織、肺血管、肺泡灌洗液及血清RELM-β的表達(dá)情況。
　　2.將帶有沉默RELM-βsiRNA基因的慢病毒通過(guò)氣管內(nèi)滴注轉(zhuǎn)染至大鼠肺內(nèi)后低氧21天，Western

3、-blot、熒光實(shí)時(shí)定量PCR、免疫熒光法檢測(cè)肺組織和肺血管RELM-β表達(dá)情況；將重組RELM-β蛋白通過(guò)氣管內(nèi)滴注間斷持續(xù)導(dǎo)入大鼠肺內(nèi)增強(qiáng)RELM-β表達(dá)，同時(shí)低氧21天，用右心導(dǎo)管法測(cè)量大鼠平均肺動(dòng)脈壓（mPAP），稱量法計(jì)算Fulton指數(shù)（RV/LV+S），并進(jìn)行 HPSR指標(biāo)觀察。
　　3. Western-blot、免疫組織化學(xué)法檢測(cè)沉默RELM-β組和過(guò)表達(dá)RELM-β組肺組織及肺血管p-PI3K（P85

4、）、p-Akt、p-mTOR和p-PKC、p-P44/42（Thr202/Tyr204）表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1.Western blot結(jié)果顯示隨著缺氧時(shí)間的遞增RELM-β在肺組織、肺泡灌洗液、血清中表達(dá)隨不同低氧時(shí)間而變化，其蛋白表達(dá)和mRNA轉(zhuǎn)錄均在14天時(shí)達(dá)到高峰，21天下降但仍維持高水平(P＜0.05)。
　　2.定位觀察可見(jiàn)低氧條件下RELM-β主要表達(dá)在肺血管平滑肌，Ⅱ型肺泡上皮，血管內(nèi)皮及炎癥細(xì)

5、胞也有表達(dá)。
　　3.慢病毒介導(dǎo)siRNA干擾RELM-β在大鼠肺組織及肺血管的表達(dá)有效（P＜0.05），同時(shí)HPH大鼠模型心血管重塑程度明顯降低（P＜0.05）。
　　4.向大鼠肺內(nèi)給予重組RELM-β蛋白后大鼠心血管重塑情程度較低氧對(duì)照組明顯嚴(yán)重，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　5.干預(yù)RELM-β能影響肺動(dòng)脈壁PI3K、Akt、mTOR和PKC、MAPKs磷酸化水平（P＜0.05）。
　　結(jié)論：<