間歇性低氧肺動脈高壓大鼠apelin-APJ系統(tǒng)的變化及意義.pdf

1、目的：通過研究間歇性低氧肺動脈高壓大鼠血漿、肺、右心室組織apelin-36和其受體APJ蛋白水平、基因表達及其在組織分布情況,探討apelin-APJ系統(tǒng)在間歇性低氧所致的肺動脈高壓病理過程中的變化及其可能起的作用和意義. 方法：(1)間歇性低氧肺動脈高壓動物模型的復制:清潔級雄性SD大鼠50只,隨機分成5組(n=10),即:正常對照組(C)、正?？諝馀搶φ?周組(2C)、正常空氣艙對照4周組(4C)、間歇性低氧艙2周組(2

2、H)和間歇性低氧艙4周組(4H).間歇性低氧艙內(nèi),實驗期間向艙內(nèi)循環(huán)充入氮氣和氧氣,每次循環(huán)為90s,艙內(nèi)最高氧濃度維持在21﹪左右,最低氧濃度維持在9±1.5﹪.正?？諝馀搶φ战M置于間歇低氧艙相似的艙內(nèi),持續(xù)通入空氣,使0<,2>濃度21﹪左右.正?？諝馀搶φ战M和間歇低氧艙組艙內(nèi)飼養(yǎng)每天8h,每周6天.正常對照組大鼠置于室內(nèi),其他飼養(yǎng)條件與正?？諝馀搶φ战M及間歇低氧艙組相同.動物飼養(yǎng)到規(guī)定時間后,戊巴比妥鈉(3.5mg/kg,i.p.

3、)麻醉,右心導管法測量平均肺動脈壓(mPAP),右心室收縮末期壓及右心室室內(nèi)壓最大變化速率,左頸總動脈插管測平均頸動脈壓(mCAP),分別稱取右心室游離壁(RV)和左心室加室間隔(LV+S)重量.以mPAP、mCAP和RV/(LV+S)作為模型建立與否的判斷指標. (2)放射免疫(RIA)法測定血漿、右心室和肺組織勻漿apelin-36的蛋白含量. (3)逆轉(zhuǎn)錄-多聚酶鏈反應(RT-PCR)半定量檢測右心室和肺組織ape

4、lin-36mRNA及APJ mRNA基因水平. (4)免疫組織化學方法,半定量并定位檢測心肺組織中apelin-36及APJ的含量及組織內(nèi)分布. 結(jié)果： (1)間歇性低氧肺動脈高壓大鼠模型的檢測:mPAP:2H組較2C組高18.71﹪(P<0.05),4H組較4C組高16.87﹪(P<0.05).RV+dp/dt:4H組較2H組高80.97﹪(P<0.01),較4C組高56.35﹪(P<0.01).RV-dp/

5、dt:4H組較2H組高88.85﹪(Jp<0.01),較4C組高55.43﹪(P<0.01).RVSP:4H組較2H組高19.49﹪(P<0.01),較4C組高36.36﹪(P<0.01).RV/(LV+S):4H組與2H組、4C組均無顯著性差異,(P>0.05),各組間mCAP及(LV+S)/WT均無顯著性統(tǒng)計學差異(P>0.05). (2)RIA結(jié)果:各組間血漿及右心室組織勻漿apelin-36蛋白含量無統(tǒng)計學差異(P>0

6、.05),肺組織勻漿apelin-36含量4H組較C組高84﹪(P<0.05),較2H組高144﹪(P<0.01). (3)RT-PCR結(jié)果:肺組織中,apelin-36 mRNA:4H組較C組低14﹪(P<0.05)、較2H組低21﹪(P<0.01).APJ mRNA:2H組較C組高31.25﹪(P<0.05),4H組較C組高39.58﹪(P<0.05).右心室組織apelin-36 mRNA:各組間均無統(tǒng)計學差異(P>0.0

7、5).APJ mRNA:4H組較C組高78.72﹪(P<0.01),4H組較2H組高68.67﹪(P<0.05). (4)免疫組化結(jié)果:肺組織中apelin-36及APJ主要分布于肺血管內(nèi)外膜,且間歇低氧4周時肺血管外膜表達最為明顯,血管平滑肌細胞較少分布,各級支氣管上皮細胞分布較多.4H組Apelin-36含量較C組高24.86﹪(P<0.05),較2H組高30.32﹪(P<0.01),APJ在2H組較C組高40.98﹪(P<

8、0.05),而4H組較C組高61.30﹪(P<0.05).右心室組織免疫組化結(jié)果顯示,Apelin-36和APJ主要分布于心肌細胞,且在橫切面見分布于胞漿內(nèi),縱切面呈與平滑肌細胞膜垂直分布的細小條紋狀,而在心肌血管內(nèi)皮細胞及血管平滑肌細胞呈低水平分布.Apelin-36:各組間均無統(tǒng)計學差異(P>0.05),APJ:2H組較C組高25.26﹪(P<0.05),4H組較C組高67.82﹪(P<0.05). 結(jié)論： 間歇性低

9、氧能使大鼠肺動脈壓力升高,該模型可以部分復制臨床SAHS引起肺動脈高壓的發(fā)病過程;間歇性低氧所導致的肺動脈高壓較持續(xù)缺氧肺動脈高壓,程度較輕,對右心室結(jié)構(gòu)影響較小;間歇性低氧形成肺動脈高壓過程中,機體肺組織apelin蛋白合成增加,右心室組織APJ受體表達增多,提示apelin-APJ系統(tǒng)的蛋白合成、基因表達及其代謝可能參與了間歇性肺動脈高壓的發(fā)生發(fā)展;Apelin-APJ在間歇性低氧肺動脈高壓模型中對機體保護作用、肺血管外膜apeli