低氧預(yù)處理對大鼠自體肝移植后胰腺的保護作用.pdf

1、1、目的：本實驗在建立大鼠自體肝移植(autologous liver transplantation，ALT)的基礎(chǔ)上，術(shù)前對大鼠給予一定的低氧預(yù)適應(yīng)(hypoxic preconditioning，HP)，研究低氧預(yù)適應(yīng)對胰腺的保護作用。通過觀察術(shù)后不同時段胰腺組織光鏡、電鏡下的改變；胰腺組織HIF-1α的表達：胰腺組織丙二醛(MDA)的測定及相應(yīng)時段胰腺外分泌功能的變化；探討胰腺組織的損害與移植肝缺血再灌注早期損傷的關(guān)系，拓寬和加

2、深低氧預(yù)適應(yīng)對移植肝具有保護作用的機制研究，從而為臨床肝臟移植采取合理的手段，減輕肝臟損傷提供理論依據(jù)和可能的技術(shù)路徑。 2、方法： 2.190只SD大鼠，隨機分為3組，低氧預(yù)適應(yīng)自體原位肝移植組(n=30)，大鼠術(shù)前24h給予氣體流量5L/min的8％氮氧混合氣體(含氧氣8％，其余為氮氣)處理90min；自體原位肝移植組(n=30)；假手術(shù)組(n=30)。 2.2三組大鼠均在術(shù)后6h、24h、48h各取10只處

3、死，經(jīng)腹主動脈采血作胰腺淀粉酶、脂肪酶檢測。切取胰腺組織立即置液氮然后放-80℃冰箱保存待MDA檢測。另取胰腺組織標(biāo)本，HE染色切片觀察顯微結(jié)構(gòu)的變化，電鏡觀察超微結(jié)構(gòu)的變化，免疫組織化學(xué)染色切片應(yīng)用MiVnt顯微圖象分析系統(tǒng)觀察胰腺組織HIF-1α的表達。 3、結(jié)果： 3.1大鼠肝臟移植手術(shù)成功的標(biāo)準(zhǔn)是手術(shù)結(jié)束后，大鼠即刻蘇醒、翻身，并能維持有效的呼吸、心跳。兩組肝移植大鼠例數(shù)各為30只。無肝期為(20±2.2) mi

4、n。 3.2低氧預(yù)適應(yīng)組大鼠血淀粉酶、脂肪酶、胰腺組織MDA的含量與自體肝移植組比較，各時間點顯著降低(p<0.05)。 3.3低氧預(yù)適應(yīng)組胰腺組織結(jié)構(gòu)損傷輕于自體肝移植組，術(shù)后6h可見胰腺能保存較正常的結(jié)構(gòu)，術(shù)后6h小葉稍水腫，以小葉間隔擴張為主。腺泡間隔擴張不明顯，少量炎性細(xì)胞浸潤。自體肝移植組胰腺組織結(jié)構(gòu)破壞明顯，伴胰腺腺泡的壞死和間質(zhì)出血。術(shù)后24h差別更為顯著。 3.4術(shù)后6h低氧預(yù)適應(yīng)組可見核形大致正

5、常，核質(zhì)分布均勻，線粒體輕度腫脹，但嵴排列良好，個別嵴膜間隙略增寬，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)亦有輕度腫脹。自體肝移植組術(shù)后6h，可見核明顯變形，核質(zhì)邊聚，線粒體腫脹明顯，部分線粒體嵴不清或斷裂，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)崩解。 3.5在假手術(shù)組，HIF-1α在胰腺組織中的表達幾乎檢測不到。自體肝移植組術(shù)后6h，HIF-1α在胰腺組織中的表達顯著上調(diào)，24 h最為顯著，與假手術(shù)組比較差異具有顯著差異(p<0.05)。低氧預(yù)適應(yīng)組術(shù)后6h、24 h、48 h，HIF-1

6、α表達與自體肝移植組相同時段比較差異具有顯著性，24h與假手術(shù)組相同時段比較差異更為顯著(p<0.05)。 4.結(jié)論： 低氧預(yù)處理對大鼠自體肝移植后胰腺具有保護作用，其機制與胰腺組織HIF-1a表達增加有關(guān)。通過對胰腺組織的保護，進而對移植肝臟產(chǎn)生保護作用，其機制可能與肝移植過程中胰腺缺血在灌注損傷產(chǎn)生的有害物質(zhì)減少有關(guān)。在肝臟移植領(lǐng)域，加強對胰腺組織的保護可能具有非常重要的臨床實踐意義。通過對胰腺組織的保護減輕移植肝臟