血紅素加氧酶-1對大鼠肝移植術(shù)后肝臟保護(hù)作用的研究.pdf

1、第一部分，目的：利用套管技術(shù)建立穩(wěn)定的大鼠原位肝移植動(dòng)物模型，模型的建立是本項(xiàng)研究的基礎(chǔ)。 方法：采用“二袖套法”完成200例次大鼠原位肝移植模型，同時(shí)結(jié)合自己的體會，對“二袖套法”進(jìn)行適當(dāng)改進(jìn)，包括套管的制作、受體的麻醉、腹主動(dòng)脈的灌注以及肝上、肝下下腔靜脈、門靜脈等血管的吻合。 結(jié)果：肝上下腔靜脈的吻合時(shí)間為10～15分鐘，無肝期為12～18分鐘，一周生存率可達(dá)75％以上。術(shù)后常見的并發(fā)癥為出血、血栓形成、感染以及膽

2、道梗阻。 結(jié)論：技術(shù)的改進(jìn)增加了生存率，包括供肝腹主動(dòng)脈灌注，在供肝的質(zhì)量上明顯優(yōu)于單純門靜脈灌注。另外，減少供肝的機(jī)械性損傷、避免套管的扭曲、提高血管的吻合質(zhì)量以及縮短無肝期，都是減少術(shù)后并發(fā)癥和提高移植物存活的關(guān)鍵。 第二部分，目的：構(gòu)建Ad-HO-1重組腺病毒載體，并鑒定其安全性及生物活性。 方法與結(jié)果：Ad-HO-1重組腺病毒載體的構(gòu)建及鑒定用限制性內(nèi)切酶XhoⅠ+HindⅢ從克隆載體PRH01中切出HO

3、-1基因片段，亞克隆至經(jīng)SalⅠ+HindⅢ酶切的克隆質(zhì)粒Puc18中，形成轉(zhuǎn)移質(zhì)粒Puc18-PRHO1，將之用KpnⅠ+HindⅢ雙酶切，再次亞克隆至經(jīng)同樣酶切的質(zhì)粒pAdTrack-CMV中，形成轉(zhuǎn)移質(zhì)粒pAdTrack-Puc18-PRHO1，將之Pme Ⅰ酶切線性化后與腺病毒基因組質(zhì)粒pAdEasy-1共轉(zhuǎn)化大腸桿菌BJ5183，在BJ5183菌種中進(jìn)行同源重組，得到腺病毒質(zhì)粒pAdEasy-HO-1，經(jīng)293細(xì)胞包裝后，擴(kuò)增

4、、濃縮，最終獲得高效、穩(wěn)定、安全表達(dá)HO-1基因腺病毒Ad-HO-1。通過PCR、基因測序進(jìn)行鑒定。 結(jié)論： 1．采用DNA重組技術(shù)，成功構(gòu)建了重組腺病毒Ad-HO-1； 2．經(jīng)PCR、熒光顯微鏡等檢測表明：重組腺病毒Ad-HO-1能高效、穩(wěn)定的表達(dá)HO-1目的基因和具有良好的安全性。 第三部分，目的：以近交系大鼠肝移植模型為基礎(chǔ)，研究HO-1基因轉(zhuǎn)染對移植肝的保護(hù)作用。 方法與結(jié)果：以近交系大鼠