血紅素加氧酶-1（HO-1）對(duì)大鼠原位肝移植細(xì)胞保護(hù)和抗炎作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的 1、熟練掌握Wistat大鼠原位肝移植免疫耐受動(dòng)物模型的建立，在此基礎(chǔ)上建立DA→Lewis原位肝移植免疫排斥模型。2、探討血紅素加氧酶一1(HO-1)在誘導(dǎo)劑和抑制劑(CoPP、ZnPP)作用下，大鼠移植排斥模型中HO-1表達(dá)情況，探討：HO-1在大鼠肝移植排斥模型中對(duì)促炎癥因子(IFN-γ，IL-12)和抑制炎癥因子(IL-4，TGF-β1)的影響。3、通過(guò)大鼠肝移植排斥模型，觀察HO-1不同表達(dá)對(duì)其術(shù)后肝功能的影響、肝組織

2、內(nèi)炎癥細(xì)胞侵潤(rùn)以及排斥的嚴(yán)重程度(中性粒細(xì)胞，淋巴細(xì)胞情況)、凋亡因子Bcl．2和血管粘附因子(VCAM-1)等的變化。通過(guò)以上實(shí)驗(yàn)，試圖了解血紅素加氧酶一1(HO-1)對(duì)大鼠原位肝移植肝細(xì)胞保護(hù)和抗炎的作用。 方法1、按改良“二袖套法”建立大鼠原位肝移植免疫耐受模型。2、同法建立大鼠原位肝移植排斥模型，將大鼠分為三組：對(duì)照組(A組)，ZnPP組(B組)和CoPP組(C組)。三組分別于3天和7天處死，取血及肝臟標(biāo)本。全自動(dòng)化生化

3、分析儀測(cè)定肝功情況；肝組織：HE染色；免疫組化方法(SP)檢測(cè)淋巴細(xì)胞及BCL-2的表達(dá)；髓過(guò)氧化酶染色(MPO)檢測(cè)中性粒細(xì)胞的表達(dá)。3、實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR分析肝組織中HO-1、IFN-γ、IL-12、IL-4、TGF-β1、VCAM-1的表達(dá)。 結(jié)果 1、成功建立了大鼠肝移植免疫耐受和排斥模型。2、三組肝功能 (TBIL、ALT、AST)3天、7天時(shí)結(jié)果相比都有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義．P<0.05。ALB降低依次是B組、

4、A組和C組。3、HE染色：A組大鼠3天出現(xiàn)I、II級(jí)為主的排斥反應(yīng)，7天時(shí)出現(xiàn)II級(jí)為主的排斥反應(yīng)；B組3天出現(xiàn)II級(jí)為主的排斥反應(yīng)，7天時(shí)出現(xiàn)II、III級(jí)為主的排斥反應(yīng)；C組3天出現(xiàn)排斥反應(yīng)O-II級(jí)，以I級(jí)為主，7天時(shí)出現(xiàn)排斥反應(yīng)O～I(xiàn)I級(jí)，以I、II級(jí)為主。4、三組肝組織中淋巴細(xì)胞免疫組化染色陽(yáng)性面積百分率(X±S，％)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示：三組3天、7天時(shí)都有明顯的差異，P<0.05。5、肝組織中中性粒細(xì)胞髓過(guò)氧化酶染色陽(yáng)性面積百分

5、率(X±S，％)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示：3天、7天時(shí)三組分別相比，B組與A組或C組相比有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05；A組與C組沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P>0.05。5、熒光定量RT-PCR分析 1)HO-1： C組3、7天時(shí)表達(dá)明顯升高，與A組或B組相比有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05，A組表達(dá)較低，B組基本沒(méi)有表達(dá)。2)IL-4：3天時(shí)C組與B組或A組比較有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05，A組與B組相比沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；7天時(shí)，C組與B組比較有明

6、顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05，A組與另兩組相比沒(méi)有意義。3)TGF-β1： 3天時(shí)B組與C組相比P<0.05，A組與B或C組相比P>0.05；7天時(shí)C組與A或B組相比P<0.05，A組與B組P>0.05。4)IFN-γ：3天和7天時(shí)B組與C組相比P<0.05，A組與B組或C組相比P>0.05。5)IL-12：3天時(shí)B組與C組相比P<0.05，A組與B組或C組相比P>0.05；7天時(shí)三組相比沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P>0.05。6)VCAIVl．

7、1：3天時(shí)C組與A組或B組相比P<0.05，A組與B組相比P>0.05；7天時(shí)B組與C組相比P<0.05，A組與B組或C組相比P>0.05。 結(jié)論 1、血紅素加氧酶-1(HO-1)在誘導(dǎo)劑CoPP作用下表達(dá)增強(qiáng)，在抑制劑ZnPP作用下基本不表達(dá)。2、HO-1在大鼠肝移植排斥模型中降低促炎癥因子(IFN-γ，IL-12)的表達(dá)，增強(qiáng)抑炎癥因子(IL-4，TGF-β 1)的表達(dá)。3、HO-1在大鼠肝移植排斥模型中能減輕肝功能的損害