血紅素加氧酶-1在大鼠肝移植急性排斥反應(yīng)中的免疫調(diào)節(jié)作用.pdf

1、目的 建立MHC不相容的近交系大鼠原位肝移植(OLT)急性排斥模型，通過血紅素加氧酶-1(HO-1)的誘導(dǎo)劑和抑制劑，分別誘導(dǎo)和抑制HO-l在肝組織中的表達(dá)，觀察HO-1對大鼠肝移植術(shù)后肝功能的影響、移植物急性排斥分級、炎性細(xì)胞和細(xì)胞因子的表達(dá)，探討HO-1在肝移植急性排斥反應(yīng)中的免疫調(diào)節(jié)作用。 方法1．采用“二袖套管法”，通過Wistar→Wistar(或SD)作為ROLT前期技能訓(xùn)練，然后用MHC不相容的DA為供體， LE

2、W大鼠為受體，建立穩(wěn)定的ROLT急性排斥模型。2．實(shí)驗(yàn)分組：(1)A組：供體術(shù)前24h用HO-1誘導(dǎo)劑鈷原卟啉(CoPP)，5mg／kg，腹腔注射，n=9；(2)B組：供體術(shù)前24h用：HO-1抑制劑鋅原卟啉(znPP)，20mg／kg，腹腔注射，n=9；(3)C組：供體術(shù)前24h，腹腔注射生理鹽水2ml作為對照組，n=8。3．觀察指標(biāo)：(1)ROLT術(shù)后各組一般情況，包括精神狀態(tài)、飲食、體重、皮膚的黃染程度；(2)術(shù)后3d，7d檢測血

3、清TBIL，ALT的水平；(3)病理學(xué)檢查：術(shù)后3d，7d取各組肝臟組織標(biāo)本，蘇木素-伊紅(H&E)染色，依照Banff標(biāo)準(zhǔn)對各組大鼠進(jìn)行排斥反應(yīng)分級。髓過氧化物酶染色(MPO)觀察組織中的嗜中性粒細(xì)胞的表達(dá)；免疫組化觀察單核巨噬細(xì)胞(CD68)、淋巴細(xì)胞(CD3)以及核因子NF—κ B在肝組織中的表達(dá)。4．實(shí)時定量熒光-PCR測定和分析各組肝組織中IL-2，IL-10，和TNF-α的mRNA的表達(dá)。5．統(tǒng)計學(xué)分析：結(jié)果用均數(shù) ±SD表

4、示，各組比較用ANOVA方法，用SPSS11.5軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。 結(jié)果1.通過大鼠肝移植的手術(shù)訓(xùn)練，熟練掌握了大鼠肝移植的手術(shù)方法，DA→LEW肝移植模型供體手術(shù)成功率為100％，受體成功率88.6％，存活3d以上(含3d)為74.3％。2.血清酶學(xué)檢查：A組(CoPP)術(shù)后3d、7d血清ALT，TBIL明顯低于B組和C組，有明顯的統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)，B組C組相比無明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)；3．病理檢查術(shù)后3d

5、，7d，A組排斥反應(yīng)為Banff分級0～Ⅰ級(2～5分)；B組術(shù)后3d、7d,為Ⅱ～Ⅲ(5～9分)；C組術(shù)后3d、7d，為Ⅱ～Ⅲ(5～9分)。4．免疫組化病理學(xué)檢查：A組CD3，CD68，NF-KB陽性細(xì)胞和MPO染色中性粒細(xì)胞的表達(dá)(陽性面積百分率 ±s,％)明顯低于B組和C組(P<0.05)，B組和C組相比無明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)；5實(shí)時熒光定量-PCR檢測：A組HO-1和IL-10mRNA表達(dá)的ACT值明顯高于B組和C組，

6、IL-2，TNF-α低于B組C組(P<0.05)，B組和C組相比無明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。 結(jié)論1.DA→LEW大鼠肝移植模型具有強(qiáng)烈、穩(wěn)定的急性排斥特征，是急性排斥相關(guān)研究的良好模型；2.CoPP誘導(dǎo)HO-1表達(dá)，可減輕ROLT術(shù)后肝功能損害和急性排斥反應(yīng)的發(fā)生，與ZnPP抑制HO-1表達(dá)相比較有明顯統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。3．組織學(xué)檢查顯示，HO-1表達(dá)可減少移植肝臟組織中淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞侵潤，與抑