大黃素抗大鼠肝移植急性排斥反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、器官移植術(shù)后的排斥反應(yīng)，特別是急性細(xì)胞性排斥反應(yīng)(ACR)是困擾移植學(xué)的主要難題。臨床上以免疫抑制劑行抗排斥治療，但抗排斥藥物大多是具有明顯毒副作用。近幾十年來(lái)，人們對(duì)中醫(yī)藥的抗移植排斥作用進(jìn)行了深入的研究，以期獲得具有一定療效且較輕毒副作用的新型抗排斥中(成)藥，雷公藤即是最具代表性的成果之一。 多個(gè)體內(nèi)體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)，大黃素(中藥大黃的主要成分)對(duì)多種原因所致的細(xì)胞因子如TNF-α、IL-6、IL-1及IL-8等大量釋放具有明

2、顯的抑制作用，而器官移植后移植免疫過(guò)程中也有類似炎性介質(zhì)釋放的增加，主導(dǎo)移植排斥。所以，大黃素是否也能影響移植免疫應(yīng)答時(shí)這些細(xì)胞因子的釋放，從而起到干預(yù)移植排斥的作用，目前國(guó)內(nèi)外尚無(wú)涉足該問(wèn)題的研究報(bào)道。 有研究證實(shí)，在一定的劑量和作用時(shí)間下，大黃素能有效的延長(zhǎng)急性排斥原位肝移植(OLT)模型大鼠的存活期，改善生存狀態(tài)。本研究繼續(xù)上述成果，旨在通過(guò)對(duì)移植肝的組織病理學(xué)觀察來(lái)明確大黃素對(duì)大鼠肝移植后ACR的抑制作用，從而為進(jìn)一步研

3、究其抑制作用的具體機(jī)制和途徑奠定理論基礎(chǔ)。 目的： 以近交系大鼠OLT急性排斥模型為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，以移植肝急性排斥反應(yīng)指數(shù)(RAI)、肝細(xì)胞凋亡指數(shù)(AI)為主要觀察指標(biāo)，以模型大鼠的存活期和存活狀態(tài)為輔助觀察指標(biāo)，研究大黃素對(duì)大鼠肝移植術(shù)后ACR的干預(yù)作用。 方法： 實(shí)驗(yàn)第一部分，先以SPF級(jí)SD-SD大鼠OLT模型為對(duì)象，學(xué)習(xí)大鼠OLT模型建立。達(dá)到熟練操作后，再以SPF級(jí)近交系Lewis和BN大鼠分別作

4、為供受體，建Lewis→BN大鼠OLT模型10只，熟悉該模型操作并觀察其免疫排斥特性。 實(shí)驗(yàn)第二部分，建立Lewis→BN大鼠OLT模型45只，按完成的先后隨機(jī)分為A組(急性排斥組)、B組(CsA對(duì)照組)、C組(大黃素組)，每組15只大鼠，術(shù)后每天分別腹腔注射給藥，其中A組為生理鹽水0.5ml·d-1；B組：環(huán)孢素A(CsA)10.0mg·kg·d-1；C組：大黃素50.0mg·kg-1·d-1。 連續(xù)用藥8天后停藥并每

5、組處死6只大鼠取其肝臟組織行常規(guī)石蠟包埋，其余大鼠繼續(xù)飼養(yǎng)以觀察存活期。再取肝組織臘塊切片分別行HE染色和Tunel染色以觀察肝組織RAI和肝細(xì)胞AI。 結(jié)果： 第一部分共行SD→SD大鼠OLT模型約140對(duì)，各項(xiàng)手術(shù)操作數(shù)據(jù)達(dá)到實(shí)驗(yàn)要求，總耗時(shí)約3個(gè)月。并通過(guò)模型制作了解了Lewis→BN大鼠OLT模型的制作特點(diǎn)和移植免疫學(xué)特性。 第二部分：各組3天內(nèi)死亡的大鼠分別為3、2、2只，3天總存活率為84.4％。A組

6、大鼠的生存狀態(tài)明顯差于B、C組。不包括術(shù)后3天內(nèi)死亡的和第8天處死的大鼠，A、B、C各組大鼠的存活期(天)分別為9.50±1.64、21.57±2.15、、21.29±2.21，其中，B、C各組的存活期較A組均明顯延長(zhǎng)(P＜0.01)，B、C組存活期間無(wú)明顯差別(P＞0.05)。 在HE染色片上觀察A、B、C各組大鼠移植肝術(shù)后RAI(Banff方案)分別為7.67±0.98、5.17±0.40、5.83±0.75，其中B、C組的

7、RAI較A組均明顯降低(P＜0.01)，B、C組間差別無(wú)意義(P＞0.05)。 在Tunel染色片上觀察A、B、C各組大鼠移植肝的肝細(xì)胞AI分別為35.83±2.32、15.83±1.33、16.50±2.35，其中B、C組的AI較A組均明顯降低(P＜0.01)，B、C組間差別無(wú)意義(P＞0.05)。 結(jié)論： 大黃素能明顯降低移植肝的排斥反應(yīng)指數(shù)、減少肝細(xì)胞凋亡，也能延長(zhǎng)大鼠OLT后存活期、改善生存狀態(tài)，對(duì)大鼠肝