肝再生增強(qiáng)因子與大鼠原位肝移植急性排斥反應(yīng)相關(guān)性作用研究.pdf

1、目的：1.探討建立穩(wěn)定的大鼠肝移植動(dòng)物模型的方法和手術(shù)技巧，為進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)提供能夠長期存活的穩(wěn)定的肝移植動(dòng)物模型。2.研究同種同基因肝移植(syngenic liver transplantation)和同種異基因肝移植(allogenic liver transplantation)后大鼠肝臟急性排斥反應(yīng)(acute rejection，AR)病理表現(xiàn)、肝功能變化和肝臟組織內(nèi)肝再生增強(qiáng)因子(augmenter ofliver rege

2、neration，ALR)與INF-γ、IL-2表達(dá)變化的關(guān)系，從而探討ALR與大鼠肝臟移植后急性排斥反應(yīng)的相關(guān)性。 方法：1.采用Kamada“二袖套法”，稍加改進(jìn)建立大鼠原位肝移植動(dòng)物模型，即采用端端連續(xù)縫合法吻合肝上下腔靜脈，用雙袖套法吻合門靜脈及肝下下腔靜脈，肝動(dòng)脈結(jié)扎不予重建，膽管用內(nèi)支架法完成膽道重建。術(shù)后觀察大鼠存活率和生存質(zhì)量，總結(jié)手術(shù)技巧、經(jīng)驗(yàn)和方法，掌握成熟穩(wěn)定的大鼠原位肝移植動(dòng)物模型手術(shù)技術(shù)。2.采用上述方

3、法建立Lewis(LEW，Rt11)→Brown Norway(BN，Rt1n)和BN→BN大鼠同種異基因肝移植(A組)和同種同基因肝移植(B組)動(dòng)物模型。每組正常存活大鼠12只，于1、3、5、7天分別活殺3只取外周血漿及肝臟組織標(biāo)本。光鏡觀察肝臟組織形態(tài)學(xué)改變；全自動(dòng)生化分析儀檢測外周血血漿ALT、AST和TBIL；免疫組織化學(xué)、Real time-PCR檢測ALR、INF-γ和IL-2蛋白和基因的表達(dá)。 結(jié)果：1.經(jīng)過反復(fù)的

4、練習(xí)，采用改良的Kamada“二袖套法”能夠成功的建立穩(wěn)定的大鼠原位肝移植動(dòng)物模型，術(shù)后7天生存率達(dá)到90％以上。并且在后續(xù)的試驗(yàn)中我們成功的建立了從LEW→BN大鼠肝移植急性排斥反應(yīng)動(dòng)物模型，從術(shù)后3天開始出現(xiàn)急性排斥反應(yīng)病理表現(xiàn)(Banff標(biāo)準(zhǔn))，第5、7天最為典型。而BN→BN大鼠肝移植后相同時(shí)相點(diǎn)肝臟組織未見明顯的急性排斥反應(yīng)病理表現(xiàn)。2.術(shù)后第1天兩組肝臟組織病理損傷程度相似，同種異基因移植組肝功能變化與同種同基因移植組無統(tǒng)計(jì)

5、學(xué)差異；ALR(1.13±0.10 v.s 1.094±0.12)與IL-2(0.315±0.088 v.s 0.279±0.048)兩組比較數(shù)據(jù)均無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P＞0.05。而同種異基因移植組INF-γ(0.052±0.009)明顯高于同種同基因移植組(0.007±0.003)，P＜0.05。第3、5、7天兩組大鼠肝臟組織病理變化及肝功能損傷均逐漸加重，同種異基因移植組INF-γ(0.477±0.117，0.162±0.021，0

6、.122±0.014)和IL-2(2.718±0.479，3.330±0.562，3.506±0.367)表達(dá)較同種同基因移植組INF-γ(0.014±0.004，0.012±0.004，0.016±0.003)及IL-2(0.296±0.057，0.320±0.027，0.286±0.048)明顯升高，P＜0.05。但ALR的表達(dá)在同種同基因移植組(0.81±0.11，2.86±0.37，3.19±0.35)明顯高于同種異基因移植組(

7、0.59±0.10，1.57±0.27，1.98±0.13)，P＜0.05。同種異基因移植組ALR mRNA升高的同時(shí)，該組肝臟組織內(nèi)INF-γmRNA表達(dá)進(jìn)行性下降，但I(xiàn)L-2 mRNA卻緩慢升高。同種同基因組未見相似的變化趨勢。3.本實(shí)驗(yàn)首次通過體內(nèi)研究發(fā)現(xiàn)肝移植急性排斥過程中ALR和免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞因子INF-γ的表達(dá)呈明顯的負(fù)性相關(guān)(r=-0.86，P＜0.05)，而ALR和IL-2的表達(dá)無相關(guān)性(r=0.322，P＞0.05)。