壽胎丸抗大鼠同種異體卵巢移植模型急性排斥反應(yīng)的機(jī)理研究.pdf

1、目的: 本課題通過建立SD 和 Wistar 大鼠間同種異體卵巢移植模型，觀察補(bǔ)腎復(fù)方“壽胎丸”對(duì)同種異體卵巢移植后急性排斥反應(yīng)的作用。本實(shí)驗(yàn)旨在通過觀察壽胎丸對(duì)大鼠同種異體卵巢移植模型組織形態(tài)學(xué)與超微結(jié)構(gòu)的影響、內(nèi)分泌激素的影響、T 淋巴細(xì)胞亞群的影響及細(xì)胞因子 IL-2、IFN-γ的影響，來探討補(bǔ)腎中藥復(fù)方“壽胎丸”抗卵巢移植急性排斥反應(yīng)的機(jī)理。 方法: 238只Wistar 雌性大鼠隨機(jī)分為7組，每組大鼠3

2、4只。①壽胎丸低劑量組；②壽胎丸中劑量組；③壽胎丸高劑量組；④CsA組；⑤CsA+壽胎丸中劑量組：⑥正常組；⑦模型組。⑥組為正常組，不予手術(shù)處理。移植術(shù)前一日以及移植術(shù)后第 5—14天，15—28天，29—35 天中雌激素分泌最高峰當(dāng)日取血檢測(cè)血清E<,2>、P、FSH。各組于移植術(shù)后 d7、d14、d21、d28、d35 分批處死Wistar大鼠各5、8、8、8、5 只。取血、雙側(cè)卵巢及脾臟：檢測(cè)與移植排斥密切相關(guān)的血清 Th1 細(xì)胞

3、因子：IL-2、IFN-γ；用流式細(xì)胞儀檢測(cè)脾臟 T 淋巴細(xì)胞亞群CD3<'+>、CD4<'+>、CD8<'+>的比值；光鏡下計(jì)算各個(gè)發(fā)育階段卵泡、黃體的數(shù)量，觀察間質(zhì)的變化，以及組織壞死或纖維化程度；電鏡下觀察移植卵巢超微結(jié)構(gòu)變化。觀察記錄各組動(dòng)物的體重、活動(dòng)、皮毛、進(jìn)食及糞便情況，比較分析藥物的副反應(yīng)。 結(jié)果: 1．移植卵巢組織形態(tài)學(xué)及超微結(jié)構(gòu) 移植術(shù)后，各卵巢移植組大鼠動(dòng)情周期恢復(fù)率由高到低依次是：CsA＋

4、壽胎丸中劑量組、CsA組、壽胎丸高劑量組、壽胎丸中劑量組、壽胎丸低劑量組、模型組。壽胎丸低、中、高劑量組、CsA 組、CsA＋壽胎丸中劑量組移植卵巢體積和重量均較正常組卵巢有增加；且均高于模型組，差異有顯著性(P<0.01)。壽胎丸低、中劑量組移植卵巢重量低于壽胎丸高劑量組，差異有顯著性 (P<0.05)。CsA＋壽胎丸中劑量組大鼠移植卵巢的間質(zhì)損害程度最輕。壽胎丸低、中、高劑量組、CsA組、CsA＋壽胎丸中劑量組的卵巢黃體、原始卵泡、

5、初級(jí)生長卵泡、成熟卵泡數(shù)目均高于模型組，差異有顯著性(P<0.01)。壽胎丸中、高劑量組、CsA組、CsA＋壽胎丸中劑量組的次級(jí)生長卵泡數(shù)目均高于模型組，差異有顯著性(P<0.01)。壽胎丸低、中劑量組初級(jí)生長卵泡數(shù)目均低于壽胎丸高劑量組，差異有顯著性(P<0.01)。壽胎丸低、中、高劑量組次級(jí)生長卵泡數(shù)目相比較，均有顯著性差異，(P<0.01)。CsA＋壽胎丸中劑量組的原始卵泡和初級(jí)生長卵泡數(shù)目顯著高于CsA組 (P<0.01)。

6、 移植術(shù)后21天，模型組卵巢超微結(jié)構(gòu)呈現(xiàn)急性排斥反應(yīng)的表現(xiàn)。壽胎丸低、中、高劑量組、CsA 組、CsA＋壽胎丸中劑量組移植卵巢超微結(jié)構(gòu)基本正常，新生毛細(xì)血管結(jié)構(gòu)正常。移植術(shù)后35天，各組移植卵巢超微結(jié)構(gòu)均呈現(xiàn)褪化現(xiàn)象，但CsA＋壽胎丸中劑量組褪化程度較輕。 2．血清內(nèi)分泌激素E<,2>、P、FSH 移植術(shù)前，各卵巢移植組血清E<,2>、P水平均低于正常組，差異有顯著性(P<0.01)。在移植術(shù)后5—14 天血清 E<

7、,2>、P水平有大幅度升高，與移植前水平相比較，有顯著性差異(P<0.01)。 移植術(shù)后15—28天，壽胎丸低、中、高劑量組、CsA組、CsA＋壽胎丸中劑量組血清 E<,2>、P水平繼續(xù)升高，均高于模型組，差異有顯著性 (P<0.01)。CsA＋壽胎丸中劑量組血清E<,2>、P水平最高，與正常組相比，無顯著性差異。壽胎丸低劑量組血清E<,2>、P水平低于壽胎丸高劑量組，差異有顯著性 (P<0.01)。 移植術(shù)后29—35

8、天，壽胎丸低、中、高劑量組、CsA組、CsA＋壽胎丸中劑量組血清E<,2>、P水平均高于模型組，差異有顯著性 (P<0.01)。CsA＋壽胎丸中劑量組血清E<,2>、P水平高于模型組、壽胎丸低、中、高劑量組及CsA組。壽胎丸低劑量組與壽胎丸高劑量組血清P水平相比，有顯著性差異(P<0.05)。 移植術(shù)前各卵巢移植組血清FSH水平均高于正常組，差異有顯著性(P<0.01)。壽胎丸低、中、高劑量組、CsA．組、CsA＋壽胎丸中劑量組

9、移植術(shù)后FSH水平開始逐漸下降，移植術(shù)后5—14天、術(shù)后15—28天及術(shù)后29—35天血清FSH水平均低于移植前水平，差異有顯著性。模型組大鼠移植術(shù)后各時(shí)間段的血清FSH水平比較，無顯著性差異。 3．脾臟T淋巴細(xì)胞亞群CD3<'+>、CD4<'+>、CD8<'+>含量 移植術(shù)后7天，各卵巢移植組大鼠脾臟CD3<'+>、CD4<'+>、CD8<'+>含量比正常組明顯升高，差異有顯著性。移植術(shù)后14天，CsA＋壽胎丸中劑量組

10、CD3<'+>含量較術(shù)后7天降低明顯，差異有顯著性(P<0.05)。組間比較，壽胎丸中、高劑量組、CsA組、CsA＋壽胎丸中劑量組CD3<'+>含量均低于模型組，差異有顯著性。壽胎丸高劑量組、CsA組、CsA＋壽胎丸中劑量組CD4<'+>含量較術(shù)后7天降低明顯，差異有顯著性。組間比較，壽胎丸低、中、高劑量組、CsA組、CsA＋壽胎丸中劑量組CD4<'+>含量均低于模型組，差異有顯著性。壽胎丸低、中、高劑量組大鼠脾臟CD8<'+>水平高于

11、正常組，差異有顯著性(P<0.05)。 移植術(shù)后21天，壽胎丸低、中、高劑量組、CsA組、CsA＋壽胎丸中劑量組大鼠脾臟CD3<'+>、CD4<'+>含量繼續(xù)下降，均低于模型組(P<0.01)。壽胎丸低、中劑量組大鼠脾臟CD3<'+>含量高于正常組，差異有顯著性(P<0.01)。壽胎丸低、中劑量組CD4<'+>含量高于正常組、壽胎丸高劑量組、CsA組、CsA＋壽胎丸中劑組，差異有顯著性。 移植術(shù)后28天，壽胎丸低、中、高

12、劑量組、CsA組、CsA＋壽胎丸中劑量組大鼠脾臟CD3<'+>、CD4<'+>含量繼續(xù)降低，均低于模型組(P<0.01)。壽胎丸低劑量組CD3<'+>、CD4<'+>含量高于壽胎丸高劑量組、CsA組、CsA＋壽胎丸中劑量組及正常組，差異有顯著性。CsA組、CsA＋壽胎丸中劑量組CD8<'+>含量低于模型組，差異有顯著性(P<0.05)。 移植術(shù)后35天，壽胎丸低、中、高劑量組、CsA組、CsA＋壽胎丸中劑量組大鼠脾臟CD3<'+

13、>含量、CD4<'+>含量仍較低，均低于模型組，差異有顯著性(P<0.01)。壽胎丸低劑量組的大鼠脾臟CD3<'+>、CD4<'+>含量高于正常組，差異有顯著性。各組CD8<'+>水平相比，無顯著性差異。 4．血清細(xì)胞因子IL-2、IFN-γ 各卵巢移植組大鼠移植術(shù)后7天的血清IL-2水平較高，均高于正常組水平，差異有顯著性。移植術(shù)后14天時(shí)各卵巢移植組血清IL-2水平有所下降，壽胎丸中、高劑量組、CsA＋壽胎丸中劑量、

14、CsA組血清IL-2水平均低于模型組，差異有顯著性。移植術(shù)后21天，壽胎丸低、中、高劑量組、CsA組、CsA＋壽胎丸中劑量組血清IL-2水平繼續(xù)下降，均低于模型組水平，差異有顯著性。移植術(shù)后28天，CsA＋壽胎丸中劑量組大鼠血清IL-2 水平低于模型組，差異有顯著性 (P<0.05)。移植術(shù)后35天，各組大鼠血清 IL-2 水平組間比較，無顯著性差異。 移植術(shù)后7天，各卵巢移植組大鼠血清IFN-γ水平均較正常組升高，差異有顯著性

15、。移植術(shù)后14天，模型組血清IFN-γ水平較正常組升高，差異有顯著性(P<0.01)。移植術(shù)后21天，CsA組、CsA＋壽胎丸中劑量血清IFN-γ水平低于術(shù)后7天水平，差異有顯著性(P<0.05)。組間比較，模型組血清IFN-γ水平較正常組升高，差異有顯著性(P<0.05)。移植術(shù)后28天，壽胎丸低、中、高劑量組、CsA組、CsA＋壽胎丸中劑量組血清IFN-γ水平低于術(shù)后7天水平，差異有顯著性。組間比較，壽胎丸中、高劑量組、CsA＋壽胎

16、丸中劑量組、CsA組血清IFN-γ水平低于模型組，差異有顯著性。移植術(shù)后35天，CsA＋壽胎丸中劑量組血清 IFN-γ水平低于模型組，差異有顯著性(P<0.05)。 結(jié)論: 1．壽胎丸有助于移植術(shù)后大鼠動(dòng)情周期的恢復(fù)，與CsA聯(lián)合應(yīng)用，協(xié)同作用明顯。壽胎丸促進(jìn)移植卵巢的成活，使其重量和體積增加，壽胎丸高劑量組在促進(jìn)移植卵巢重量增加方面優(yōu)于壽胎丸低、中劑量組。壽胎丸可以減輕移植卵巢急性排斥反應(yīng)引起的間質(zhì)損害程度，與CsA聯(lián)

17、合應(yīng)用，有協(xié)同作用。壽胎丸有促進(jìn)移植卵巢黃體及各階段卵泡發(fā)育的作用，尤其是對(duì)原始卵泡及初級(jí)生長卵泡的發(fā)育有更明顯的作用，并且存在一定的量效關(guān)系。壽胎丸與CsA聯(lián)合應(yīng)用，可以減輕移植卵巢超微結(jié)構(gòu)的異常改變。 2．壽胎丸可促使移植卵巢恢復(fù)內(nèi)分泌功能，減緩其內(nèi)分泌功能的丟失，與CsA聯(lián)合應(yīng)用，有協(xié)同作用；壽胎丸低、中、高劑量間有一定的量效關(guān)系。壽胎丸可促使移植卵巢與垂體建立負(fù)反饋調(diào)節(jié)反應(yīng)。 3．壽胎丸抑制了大鼠同種異體卵巢移植