二氯亞甲基二磷酸對大鼠同種異體角膜移植排斥反應(yīng)的影響.pdf

1、第一部分:大鼠角膜移植動物模型的建立 目的：建立同種異體大鼠穿透性角膜移植模型，總結(jié)模型制作中并發(fā)癥的出現(xiàn)原因和相應(yīng)對策，提高大鼠角膜移植模型的成功率，為角膜移植排斥反應(yīng)的研究打下基礎(chǔ)。 方法：采用遠(yuǎn)交系Wistar雌性大鼠和SD雌性大鼠建立穿透性角膜移植模型。植片直徑3.5mm，植孔直徑3.0mm，植片采用間斷縫合，縫合八針。 結(jié)果：在保留縫線、不加干預(yù)的情況下，大鼠角膜移植后16天，角膜植片排斥反應(yīng)發(fā)生率在1

2、00％，平均存活時間8.9±2.3d。 結(jié)論：大鼠角膜移植模型較小鼠容易制作，其手術(shù)步驟和臨床經(jīng)過與人類角膜移植相似，排斥反應(yīng)發(fā)生早且排斥率高；縫合八針并發(fā)癥發(fā)生率較低，適用于模擬人類角膜移植進(jìn)行深入的相關(guān)基礎(chǔ)和臨床研究。熟練的顯微操作技術(shù)，良好的手術(shù)器械，以及充分散大的瞳孔可以最大程度地減少術(shù)后并發(fā)癥的發(fā)生。 第二部分:包載Cl22MDP脂質(zhì)體的制備及其包封率的測定 目的：用膽固醇和卵磷脂包裹Cl2MDP制備C

3、l2MDP-LIP并測定二氯亞甲基二磷酸的包封率。 方法：采用薄膜分散法制備二氯亞甲基二磷酸脂質(zhì)體，利用毛細(xì)管電泳-間接紫外方法測定脂質(zhì)體的包封率。 結(jié)果：所得制劑均勻，分散良好，在0.5-10mg/ml范圍內(nèi)，Cl2MDP-LIP對照品的峰面積(A)與其濃度(C)線性為A=12893C+7440，呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系(R2=0.9992)。 結(jié)論：二氯亞甲基二磷酸脂質(zhì)體制備方法和檢測方法均簡單，準(zhǔn)確；包封率達(dá)到市

4、售標(biāo)準(zhǔn)。 第三部分:二氯亞甲基二磷酸對大鼠同種異體角膜移植排斥反應(yīng)的影響 目的：探討結(jié)膜下注射二氯亞甲基二磷酸質(zhì)脂體消減巨噬細(xì)胞對大鼠同種異體角膜移植排斥反應(yīng)的影響。 方法：在大鼠行同種異體角膜移植后分為兩組，治療組立即在近角膜緣結(jié)膜下注射二氯亞甲基二磷酸質(zhì)脂體100ul，對照組結(jié)膜下注射相同劑量PBS，并與術(shù)后2、4、6、8天重復(fù)。觀察角膜排斥反應(yīng)的情況，并用免疫組化、流式細(xì)胞儀檢測大鼠角膜內(nèi)巨噬細(xì)胞數(shù)量；用E

5、LISA法檢測植片內(nèi)IL-1β的含量。 結(jié)果：植片存活時間對照組為8.9±2.3d，治療組為26.5±3.4d，與對照組相比，治療組植片存活時間明顯延長(p＜0.01)，且植片的新生血管指數(shù)、水腫指數(shù)、渾濁指數(shù)及RI值4項指標(biāo)均明顯優(yōu)于對照組，具有顯著性差異(p＜0.01)。在治療組植片中免疫組化、流式細(xì)胞儀未檢測到CD68陽性表達(dá)的巨噬細(xì)胞，ELISA法未檢測到IL-1β，而對照組角膜植片可以檢測到CD68陽性表達(dá)的巨噬細(xì)胞及