CD44分子與同種異體腎移植急性排斥反應的研究.pdf

1、目的：
　　 1 建立大鼠腎移植急性排斥反應模型,為研究急性排斥反應早期診斷及治療提供實驗動物模型。
　　 2 了解大鼠移植腎急件排斥反應病理變化規(guī)律,了解CD44在大鼠移植腎的表達情況,探討可溶性CD44分子在腎移植急性排斥反應大鼠外周血的表達情況。
　　 3 收集臨床病例,探討CD44在排斥反應患者移植腎組織的表達,CD44在患者外周血的表達規(guī)律。
　　 方法：
　　 1 建立大鼠腎移植急性排

2、斥反應模型
　　 SPF(清潔級)健康大鼠,由南方醫(yī)科大學實驗動物中心提供,動物實驗遵守國家衛(wèi)生部及南方醫(yī)科大學動物條例,供體為wistar大鼠,體重300-350克,雌雄不限,SD雄性大鼠為受體,體重300-350克；供體麻醉后,經(jīng)腹取雙腎及足夠長的腹主動脈和后腔靜脈,置于0℃-4℃林格液中修整,結扎右腎動、靜脈,切除右腎,剪去多余的脂肪組織,修整腹主動脈、后腔靜脈；受體大鼠麻醉,開腹先切除受體大鼠原腎,移植腎置入,供體的腹主

3、動脈和后腔靜脈與受體的腹主動脈和后腔靜脈端側吻合,供體膀胱修剪為膀胱瓣,在受體膀胱上剪一直徑3mm的切口,無損傷縫合線間斷縫合,清點器械及輔料,依次關閉切口;手術后受體大鼠保溫2小時至完全清醒活動,放入清潔籠內(nèi)單籠飼養(yǎng),當天禁食,給予5％葡萄糖鹽水飲用,手術后第一天開始給予食物,術后觀察精神狀態(tài)、活動情況、飲食情況、體重增減、大便件狀等。
　　 2 CD44在移植腎急性排斥反應大鼠中的表達
　　 同上建立大鼠腎移植急性排

4、斥反應模型,實驗動物分為排斥組(AR)、無排斥對照組(control)、正常組(normal)每組10只,分別于手術后3天、5天、7天、9天、14天各時間點,于移植腎的下極尖刀片切取小塊腎組織,移植腎創(chuàng)面止血紗布壓迫止血,關閉切口,肌注青霉素抗感染,常規(guī)病理染色觀察移植腎大鼠急性排斥反應變化；于術后3天,5天,7天,9天,14天各時間點,斷尾法采外周靜脈血,納入實驗的正常組大鼠從實驗開始第3天、5天、7天、9天、14天各時間點斷尾法采外

5、周靜脈血,酶聯(lián)免疫吸附法檢測外周血可溶性CD44分子的表達(ELISA法)。
　　 3 CD44在腎移植患者急性排斥反應中的表達
　　 收集臨床病例,此部分病例資料分3部分,各部分間有重復。第一部分從臨床疑似急性排斥反應的患者中抽出28例行穿刺病理活檢證實為移植腎急性排斥反應,另取28例慢性排斥反應移植腎失功而行移植腎切除的患者和28例正常腎組織,實驗共分急性排斥反應組(AR)、慢性排斥反應組(CR)和正常組(norma

6、l)行免疫組織化學檢測CD44在各實驗組織中的表達；第二部分患者為2007-2009年間在暨南大學附屬第一醫(yī)院接受腎移植手術患者,13例行穿刺病理活檢證實為移植腎急性排斥反應,分為急性排斥反應組(AR)和穩(wěn)定組(stable),分別于患者移植前及移植后的第1天、3天、5天、7天、9天、14天各時間點,留取外周靜脈血標木ELISA法檢測CD44分子在排斥反應患者及穩(wěn)定患者外周血表達濃度及配體透明質酸(HA)的表達濃度,取患者移植前外周血2

7、ml流式細胞儀檢測CD4+T、CD8+T淋巴細胞表面表達CD44情況；第三部分2007年以前行腎移植手術,2007-2009年間在暨南大學附屬第一醫(yī)院接受回訪的患者,此部分患者有15例被穿刺活檢病理確診為急性排斥反應,分別于患者治療前、后留取血標木ELISA法檢測CD44分子外周血清表達濃度及配體透明質酸(HA)的表達濃度,流式細胞儀檢測治療前、后CD8+T淋巴細胞表面表達CD44情況；分別取13例和15例與上述兩種患者同期手術的穩(wěn)定患

8、者,另外相應隨機抽取13例和15例健康獻血者靜脈血標本檢測相應指標作為正常參考值。
　　 結論：
　　 1 本實驗在已有的實驗術式基礎上,經(jīng)過技術改進,成功地構建了大鼠腎移植急性排斥反應模型,為下一步實驗研究提供了必要條件。
　　 2 通過實驗研究顯示W(wǎng)istar→SD大鼠組合建立的腎移植急性排斥反應模型,移植腎術后出現(xiàn)明顯的排斥反應,無免疫耐受出王見,無大鼠長期存活紀錄,Wistar→SD大鼠組合可以用來建立急

9、件排斥反應模型;Wistar→Wistar大鼠腎移植后,排斥程度輕微,Wistar→Wistar大鼠可以作為大鼠腎移植急性排斥模型的無排斥對照組。
　　 3 本研究證實CD44分子在大鼠急性排斥移植腎組織中表達增強,與無排斥對照組及正常腎組織相比較,差異有統(tǒng)計學意義。
　　 4 通過本實驗得出結論可溶性CD44分子及其配體透明質酸在移植腎大鼠血液中表達明顯增高,而對照組無表達或表達低。
　　 5 CD44分子在人

10、急性排斥腎組織中表達增高,高于慢性排斥反應腎組織和正常腎組織。
　　 6 患者移植術前sCD44表達水平高于穩(wěn)定組,而術前外周血CD8+CD44+T百分比、CD44+T百分比低于穩(wěn)定組。
　　 7 移植術后急性排斥反應發(fā)生前外周血sCD44和HA表達升高,急性排斥反應逆轉后sCD44和HA表達水平下降。
　　 8 急件排斥反應發(fā)生前外周血CD8+CD44+T百分比降低,急件排斥反應逆轉后CD8+CD44+T百分比