大鼠脂肪干細胞對自體肝移植缺血再灌注損傷保護作用的實驗研究.pdf

1、背景：
　　肝臟缺血再灌注損傷指肝臟經(jīng)過一段時間供血供氧不足，恢復(fù)血供后出現(xiàn)再灌注損傷。這種損傷常見于肝切除，肝移植，創(chuàng)傷等。缺血再灌注損傷在肝移植的過程中無法避免。減少肝臟缺血再灌注損傷，改善供肝的肝功能，需要尋找更多解決途徑。有研究表明，間充質(zhì)干細胞對于腦和腎缺血再灌注有一定保護作用。但對于肝臟缺血再灌注的研究較少，機制不明。脂肪間充質(zhì)干細胞是一種來源于脂肪組織的間充質(zhì)干細胞。脂肪干細胞有特定的干細胞功能，可以從脂肪組織中提取

2、，提取方法簡單，損傷小，并且具有較高的干細胞增殖率，國內(nèi)外研究較少。因此本實驗旨在研究脂肪干細胞對大鼠自體肝移植缺血再灌注損傷模型的保護作用機制。
　　目的：
　　1.建立SD大鼠自體肝移植模型并分組。SD大鼠隨機分為假手術(shù)組、自體肝移植缺血再灌注組（ischemia-reperfusion group，IR組）、自體肝移植缺血再灌注+脂肪干細胞回填組（adipose-derived stem cells group，ADS

3、Cs組）。假手術(shù)組上腹正中切口，暴露并離斷肝臟韌帶，不做其他處理。IR組用動脈夾夾閉肝門阻斷血流，肝素注射液灌注15min，不做給藥。ADSCs組在肝素注射液灌注之后30min尾靜脈注射1×106ADSCs。
　　2.提取SD大鼠原代ADSCs細胞。
　　3.研究脂肪干細胞對大鼠自體肝移植缺血再灌注損傷模型的保護作用機制
　　方法：
　　1.SD大鼠自體肝移植模型制作。
　　2.大鼠ADSCs鑒定。

4、　　3.血清ALT、AST測定大鼠肝功能。
　　4.測定氧化應(yīng)激指標SOD、MDA。
　　5.檢測線粒體活性。
　　6.HE染色觀察病理結(jié)構(gòu)。
　　7.用western blot檢測細胞ICAM-1，Bax，Bcl-2等的變化，從分子水平檢測凋亡。
　　結(jié)果：
　　1.建立了成熟SD大鼠自體肝移植模型，能良好滿足進一步實驗要求。
　　2.提取的ADSCs高表達間充質(zhì)干細胞標志CD29、CD90，

5、低表達造血系標志CD45，低表達內(nèi)皮細胞標志CD31。
　　3.與假手術(shù)組相比，IR組ALT、AST升高。與IR組相比，ADSCs組ALT、AST較低。
　　4.與假手術(shù)組相比，IR組SOD含量較低，MDA含量較高。與IR組相比，ADSCs組SOD含量較高，MDA含量較低。
　　5.與假手術(shù)組相比，IR組線粒體活性較低，與IR組相比，ADSCs組線粒體活性較強。
　　6.與假手術(shù)組相比，IR組肝細胞壞死，炎性細胞

6、浸潤嚴重，與IR組相比，ADSCs組IR組肝細胞壞死，炎性細胞浸潤較輕。
　　7.與假手術(shù)組相比，IR組ICAM-1、Bax高表達，Bcl-2低表達。與IR組相比ADSCs組ICAM-1、Bax表達低，Bcl-2表達高。
　　結(jié)論：
　　大鼠脂肪間充質(zhì)干細胞對于肝臟缺血再灌注損傷有保護作用?？赡芡ㄟ^減少氧化應(yīng)激，減少線粒體損傷，降低炎癥反應(yīng)等途徑減少肝細胞壞死或凋亡。本實驗初步探索脂肪間充質(zhì)干細胞對于肝臟缺血再灌注損傷