青錢柳黃酮的測定方法與提取分離及其生物活性研究.pdf

1、青錢柳Cyclocarya paliurus (Bata1．) Iljinskajia．系雙子葉植物綱(Dicotyledoneae) 胡桃科 (Juglandaceae) 植物，青錢柳屬。青錢柳茶可有效地用于防治糖尿病、高血壓、冠心病、神經(jīng)衰弱等疾病，被稱之為“降糖神茶”。研究表明，這些生理活性與青錢柳中所含的黃酮、三萜以及多糖等活性成分有關(guān)。目前對(duì)青錢柳黃酮還未見深入研究，這極大的影響了青錢柳的有效利用。因此本文對(duì)青錢柳黃酮的提取、

2、測定、分離純化以及抗氧化和保肝活性進(jìn)行了系統(tǒng)研究，為青錢柳及其活性成分的有效利用及綜合開發(fā)提供了理論基礎(chǔ)。主要研究內(nèi)容與結(jié)論概括如下： 1．建立了青錢柳中總黃酮含量測定方法。通過對(duì)直接測定法、三氯化鋁顯色法和硝酸鋁顯色法三種測定方法的比較，發(fā)現(xiàn)三氯化鋁顯色法精密度高，重現(xiàn)性，穩(wěn)定性和回收率效果較好，更適合青錢柳中總黃酮含量的測定。 2．探索了青錢柳總黃酮的提取工藝。采用正交 L<,9>(3<'4>) 實(shí)驗(yàn)對(duì)乙醇回流提取青

3、錢柳總黃酮的工藝條件進(jìn)行了優(yōu)化得出最佳工藝條件。最佳條件下得到總黃酮含量為22.04mg/g。采用四因素二次旋轉(zhuǎn)回歸試驗(yàn)對(duì)微波輔助提取青錢柳總黃酮的工藝條件進(jìn)行了優(yōu)化得出最佳提取條件。最優(yōu)條件下所得黃酮含量的實(shí)測值為15.6437mg/g。兩種方法比較得出：溶劑回流提取法的總黃酮得率要高于微波輔助提取，但微波輔助提取操作方便，提取時(shí)間短，大大降低了成本，節(jié)省了能源。 3．對(duì)青錢柳黃酮類化合物的分離純化和結(jié)構(gòu)鑒定進(jìn)行了研究，采用大

4、孔吸附樹脂結(jié)合制備液相色譜技術(shù)從青錢柳乙醇提取物中分離得到3個(gè)黃酮苷類單體物質(zhì)，經(jīng)IR、ESI-MS和NMR鑒定，分別為槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(Ⅰ)，山柰酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(Ⅱ)和山柰酚-7-O-α-L-鼠李糖苷(Ⅲ)。大孔吸附樹脂結(jié)合制備液相色譜技術(shù)高效快速，通量大，適合青錢柳總黃酮分離，目前關(guān)于這方面的研究還未見報(bào)道。 4．對(duì)青錢柳提取物的活性進(jìn)行了體外實(shí)驗(yàn)研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，青錢柳提取物

5、具有較強(qiáng)的清除 DPPH 自由基、超氧自由基和羥基自由基的能力，并與樣品使用濃度呈明顯的量效關(guān)系。70％乙醇提取物對(duì)油脂的氧化具有一定抑制作用，但是弱于天然抗氧化劑V<,E>和BHT。結(jié)果表明青錢柳具有較強(qiáng)的體外抗氧化特性。 5．考察了青錢柳提取物對(duì)肝纖維化小鼠的保護(hù)作用。建立CCl<,4>誘導(dǎo)的急性小鼠肝損傷模型，用試劑盒測定血清中ALT和AST的活性，肝臟中的脂質(zhì)過氧化物(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和肝臟總抗氧能力(